[发明专利]一种合成丁三醇油酸酯的重组菌及其构建方法和应用

权利要求书

1.一种合成丁三醇油酸酯的重组菌，其特征在于，所述重组菌，过表达编码酰基转移酶的基因yqeF、编码脂酰CoA合成酶的基因fadD、编码烯酰ACP还原酶的基因fabI、编码甘油激酶的基因glpK、编码3-磷酸甘油酰基转移酶的基因plsB和编码DAGP磷酸酶的基因pgpB，出发菌株为大肠杆菌，所述编码酰基转移酶的基因yqeF在NCBI的基因ID为947324，编码脂酰CoA合成酶的基因fadD在NCBI的基因ID为946327、编码烯酰ACP还原酶的基因fabI在NCBI的基因ID为945870、编码甘油激酶的基因glpK在NCBI的基因ID为948423、编码3-磷酸甘油酰基转移酶的基因plsB在NCBI的基因ID为948541和编码DAGP磷酸酶的基因pgpB在NCBI的基因ID为945863。

2.一种权利要求1所述重组菌的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）克隆酰基转移酶基因yqeF，将所得基因与质粒pACYCDuet-1进行酶切、连接，并转入E.coliDH5α感受态细胞中，筛选阳性克隆，提取质粒获得重组载体pACYCDuet-yqeF；

2）克隆脂酰CoA合成酶基因fadD，将所得基因与步骤1）所得载体pACYCDuet-yqeF进行酶切、连接，并转入E.coliDH5α感受态细胞中，筛选阳性克隆，提取质粒获得重组载体pACYCDuet-yqeF-fadD；

3) 克隆烯酰ACP还原酶基因fabI，将所得基因与质粒pCOLA Duet-1进行酶切、连接，并转入E.coliDH5α感受态细胞中，筛选阳性克隆，提取质粒获得重组载体pCOLA Duet-fabI；

4）克隆甘油激酶基因glpK，将所得基因与步骤3）所得载体pCOLADuet-fabI进行酶切、连接，并转入E.coliDH5α感受态细胞中，筛选阳性克隆，提取质粒获得重组载体pCOLADuet-fabI-glpK；

5) 克隆3-磷酸甘油酰基转移酶基因plsB，将所得基因与步骤4)所得pCOLADuet-fabI-glpK进行酶切、连接，并转入E.coliDH5α感受态细胞中，筛选阳性克隆，提取质粒获得重组载体pCOLADuet-fabI-glpK-plsB；

6）克隆DAGP磷酸酶基因pgpB，将所得基因与步骤5)所得pCOLADuet-fabI-glpK-plsB进行酶切、连接，并转入E.coliDH5α感受态细胞中，筛选阳性克隆，提取质粒获得重组载体pCOLADuet-fabI-glpK-plsB-pgpB；

7）将步骤2)与步骤6)所获得的重组载体，转化到宿主Escherichia coli BL21感受态细胞中，获得大肠杆菌重组菌。