[发明专利]含锰离子重组蛋白的大肠杆菌表达系统及其应用方法有效

专利信息
申请号: 201810863252.5 申请日: 2018-08-01
公开(公告)号: CN108998462B 公开(公告)日: 2021-06-18
发明(设计)人: 汪小锋;吴玉峰;汪卫;刘艳红;陈火晴 申请(专利权)人: 武汉康复得生物科技股份有限公司
主分类号: C12N15/70 分类号: C12N15/70;C12N1/21;C12N9/88;C12N9/02;C12N9/78;C12R1/19
代理公司: 南京纵横知识产权代理有限公司 32224 代理人: 徐瑛;祝蓉蓉
地址: 430000 湖北省武汉市东湖新技术开发区高新二*** 国省代码: 湖北;42
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摘要:
搜索关键词: 离子 重组 蛋白 大肠杆菌 表达 系统 及其 应用 方法
【权利要求书】:

1.含锰离子重组蛋白的大肠杆菌表达系统,其特征在于,所述大肠杆菌表达系统中的重组表达质粒包含大肠杆菌分子伴侣基因、含锰离子的酶蛋白基因,以及过表达锰离子通道相关蛋白基因;所述锰离子通道相关蛋白基因为OxyR基因,或OxyR基因和MntS基因;

所述大肠杆菌表达系统诱导表达含锰离子酶蛋白时,过表达所述分子伴侣基因和含锰离子的酶蛋白基因,以及过表达促进锰离子泵入相关的通道蛋白;所述大肠杆菌表达系统的原始宿主菌株为Origami2(DE3)菌株;所述大肠杆菌表达系统中的培养基为JL培养基,JL培养基的组成为酵母提取物 0.75% w/v,胰蛋白胨 1.5% w/v,KH2PO4 15 mM,(NH4)2SO425mM,甘露醇 1.8% w/v,丁二酸钠 20 mM,MgSO4 0.25 mM,起始pH 6.5;并向所述培养基中补加终浓度为0.5mM的IPTG和终浓度为5mM的MnCl2或MnSO4

所述含锰离子的酶蛋白基因为如序列SEQ ID NO.1所示的草酸脱羧酶基因A2。

2.根据权利要求1所述的含锰离子重组蛋白的大肠杆菌表达系统,其特征在于,所述分子伴侣基因为dnaK-dnaJ-grpE、groES-groEL、groES-groEL-tig或tig中的任意一种或多种。

3.根据权利要求1所述的含锰离子重组蛋白的大肠杆菌表达系统,其特征在于,所述分子伴侣基因或锰离子通道相关蛋白基因前的启动子采用相同或不同的中等强度的启动子或弱启动子;所述的启动子序列为如序列SEQ ID NO.6所示的P43启动子序列,或如序列SEQID NO.7所示的M1-93启动子,或如序列SEQ ID NO.8所示的araBAD启动子,或如序列SEQ IDNO.9所示的Lac启动子中的任意一种。

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