[发明专利]一种高产脂肽的基因工程菌及其构建方法和应用

权利要求书

1.一种高产表面活性素的基因工程菌，其特征在于，所述工程菌是将生物素羧化酶基因转化至原始菌株构建而成，其过表达生物素羧化酶；所述生物素羧化酶为YngH蛋白，所述YngH蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述原始菌株为枯草芽孢杆菌Bacillussubtilis THY-7/Pg3-srfA。

2.一种根据权利要求1所述的高产表面活性素的基因工程菌的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

扩增得到生物素羧化酶基因，将生物素羧化酶基因序列插入穿梭质粒，构建表达质粒，所述生物素羧化酶基因为YngH蛋白基因；将表达质粒导入原始菌株，构建基因工程菌。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述表达质粒的构建方法为：

将强启动子和质粒复制基因按强启动子-MCS-质粒复制基因的顺序拼接入穿梭质粒pJOE8999，其中MCS位置为目的基因插入位置，所述强启动子为启动子Pg3，所述质粒复制基因为repA基因；将生物素羧化酶基因序列插入前一步骤获得的穿梭质粒，构建表达质粒，其中前一步骤获得的穿梭质粒中插入生物素羧化酶基因序列时的酶切位点为BsrGI和PstI。

4.根据权利要求1所述的基因工程菌在制备表面活性素中的应用。

5.一种制备表面活性素的方法，其特征在于，采用根据权利要求1所述基因工程菌生产表面活性素，步骤如下：

(1)将根据权利要求1所述基因工程菌接入培养基中，进行扩大培养，得到基因工程菌菌液；

(2)按照1-20％体积百分比将步骤(1)得到的工程菌菌液接入发酵培养基中，进行发酵培养，得到含有表面活性素的发酵液。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述扩大培养的方法为：在35-40℃、摇床转速为150-200rpm的条件下培养10-20h；所述发酵培养的方法为在35-40℃、摇床转速为150-200rpm的条件下培养1.5-4h时加入0.5-1.5mM IPTG诱导剂后继续培养40-60h。