[发明专利]一种提高大叶金丝楸有效新梢分化数量的组织培养方法

权利要求书

1.一组用于提高大叶金丝楸有效新梢分化数量的组合培养基，其特征在于，该组合培养基用于组培过程中提高大叶金丝楸有效新梢分化数量，包括诱导培养基、分化培养基和生长培养基；

所述诱导培养基，MS培养基或WPM培养基+蔗糖30 g/L+琼脂6 g/L+6-BA 0.8mg/L+NAA或IBA或IAA 0.1 mg/L；

所述分化培养基，WPM培养基+蔗糖30 g/L+琼脂6 g/L+6-BA 0.6～3.0mg/L+IBA 0.1～0.3mg/L；

所述生长培养基，MS培养基+蔗糖30 g/L+琼脂6 g/L+6-BA 0.8～1.0mg/L+IBA 0.1～0.5mg/L。

2.如权利要求1所述用于提高大叶金丝楸有效新梢分化数量的组合培养基，其特征在于，该组合培养基包括生根培养基，所述生根培养基，以MS为基本培养基，其中大量元素用量减半，附加IBA 0.8mg/L、NAA 0.08mg/L、活性炭0.1～1g/L、蔗糖20g/L、琼脂6g/L。

3.如权利要求2所述用于提高大叶金丝楸有效新梢分化数量的组合培养基，其特征在于，该组合培养基具体为：

所述诱导培养基，WPM培养基+蔗糖30 g/L+琼脂6 g/L+6-BA 0.8mg/L+ IBA 0.1 mg/L；

所述分化培养基，WPM培养基+蔗糖30 g/L+琼脂6 g/L+6-BA 1.0~2.0mg/L+IBA 0.1～0.2mg/L；

所述生长培养基，MS培养基+蔗糖30 g/L+琼脂6 g/L+6-BA 0.8 mg/L+IBA 0.5mg/L；

所述生根培养基，1/2 MS培养基+IBA 0.8mg/L+NAA 0.08mg/L+活性炭0.5g/L+蔗糖20g/L+琼脂6g/L。

4.利用权利要求2或3所述组合培养基的提高大叶金丝楸有效新梢分化数量的组织培养方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：

（1）建立无菌体系

采集大叶金丝楸外植体，灭菌后，采用诱导培养基培养形成不定芽，从而建成无菌体系；

大叶金丝楸外植体的选择标准为：春季取大叶金丝楸生长健壮的新萌发枝条；

（2）两步接力方式继代培养

分切步骤（1）中诱导形成的不定芽，然后接种于第一步分化培养基中，培养10～20 d形成不定芽丛；然后转接入第二步生长培养基，继续培养10～20 d，以使丛生芽继续生长，并增加有效新梢数量，待所形成新梢高度不小于2 cm时，进行后续诱导生根培养；

（3）诱导生根培养

切取步骤（2）中高度不小于2cm、生长健壮的新梢接种到生根培养基上进行生根诱导培养，以形成生根苗；

（4）炼苗、移栽

将步骤（3）中的生根幼苗置于温室中，敞开培养瓶口，炼苗5~10天，然后将生根幼苗从培养瓶中取出，洗掉基部培养基，移栽入基质中正常管理。

5.如权利要求4所述提高大叶金丝楸有效新梢分化数量的组织培养方法，其特征在于，步骤（1）中，无菌体系构建过程中，培养条件要求为：温度23±2℃，光照强度2000Lx，光照时间7h/d；

步骤（2）中，继代培养过程中，培养条件为：温度23±2℃，光照强度2000Lx，光照时间7h/d。

6.如权利要求4所述提高大叶金丝楸有效新梢分化数量的组织培养方法，其特征在于，步骤（3）中，生根培养过程中，培养条件为：培养温度25±2℃，光照强度2000Lx，光照时间12h/d。