[发明专利]一种用于脱除黄曲霉毒素的复合酶制剂及其制备方法

权利要求书

1.一种用于脱除黄曲霉毒素的复合酶制剂的制备方法，其特征在于：包括下列步骤：

第一步：在无菌环境中，挑取保藏状态下的黄孢原毛平革菌、污叉丝孔菌、云芝、密黏褶菌，分别接种于种子培养基，然后在温度28-32℃、转速150-280rpm的条件下，培养30-60h，获得黄孢原毛平革菌基础菌种、污叉丝孔菌基础菌种、云芝基础菌种和密黏褶菌基础菌种；

第二步：在无菌环境中，将所述黄孢原毛平革菌基础菌种、污叉丝孔菌基础菌种、云芝基础菌种和密黏褶菌基础菌种，按体积比1：20-30分别转接到新的种子培养基，在温度28-32℃、转速150-280rpm的条件下，培养30-50h，获得黄孢原毛平革菌发酵菌种、污叉丝孔菌发酵菌种、云芝发酵菌种、密黏褶菌发酵菌种；

第三步：在无菌环境中，将所述黄孢原毛平革菌发酵菌种、污叉丝孔菌发酵菌种、云芝发酵菌种、密黏褶菌发酵菌种，按体积比100：20-30：10-15：10-20进行混合，获得混合发酵菌种；

第四步：将所述混合发酵菌种接种到固体发酵培养基上，然后在相对湿度50-90%、温度28-37℃环境中，发酵24-48h，接着保持环境条件不变，翻堆一次，继续发酵24-48h，获得发酵成品；

第五步：将所述发酵成品与pH值为3-6.6的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液按照体积比1：1-2.8 混合后，过滤得到滤液；

第六步：对第五步所得滤液进行超滤浓缩得到浓缩液；

第七步：对第六步所得浓缩液进行喷雾干燥，得到的粉末即为用于脱除黄曲霉毒素的复合酶制剂产品。

2.根据权利要求1所述的用于脱除黄曲霉毒素的复合酶制剂的制备方法，其特征在于：所述固体发酵培养基的制备方法包括下列步骤：

（1）将椴木粉碎成直径1-10 mm的颗粒，在自然干燥条件下放置1-3年，获得椴木粉；

（2）将椴木粉、麸皮、草木灰、长度为1-5mm的玉米秸秆粉、几丁质、纤维二糖、壳聚糖按照质量比100: 1-15: 0.01-1:1-10:0.5-2:0.5-1:1-2混合均匀，获得混合基质；

（3）将盐溶液与混合基质按照体积质量比1：0.5-3进行混合，灭菌后得到固体发酵培养基；所述盐溶液由10-20克的硫酸铵、10~30克的磷酸氢二钾和0. 5-1克的硫酸锰溶于1升水中制得。

3.根据权利要求1所述的用于脱除黄曲霉毒素的复合酶制剂的制备方法，其特征在于：所述种子培养基的制备方法包括下列步骤：

（1）将椴木粉碎成直径1-10 mm的颗粒，在自然干燥条件下放置1-3年，获得椴木粉；

（2）将椴木粉与质量分数为0.05-0.1%的氢氧化钠溶液按照质量体积比1：50-100的比例混合，20-35℃条件下浸泡12-24小时，然后过滤收集滤液，接着调节pH值至6-8，获得发酵诱导液；

（3）向每升所述发酵诱导液中添加10-20克的磷酸氢二钾、1-10克的氯化钠、0.1-1克的硫酸锰、10-20克的酵母粉，灭菌后即得种子培养基。

4.根据权利要求1所述的用于脱除黄曲霉毒素的复合酶制剂的制备方法，其特征在于：在第四步中，混合发酵菌种的接种量为固体发酵培养基的质量的5-15%。

5.根据权利要求1所述的用于脱除黄曲霉毒素的复合酶制剂的制备方法，其特征在于：在第五步中，采用板框压滤机压滤，板框压滤机中涤纶长纤滤布的型号为60-10（240），操作压力0.5-1.0MPa。

6.根据权利要求1所述的用于脱除黄曲霉毒素的复合酶制剂的制备方法，其特征在于：在第六步中，超滤浓缩采用的超滤膜为改性聚砜超滤膜，孔径40-60μm，孔密度6×10⁹-7×10⁹孔/cm²，皮层厚度为6-10μm，支撑层厚度为80-100μm。

7.根据权利要求1所述的用于脱除黄曲霉毒素的复合酶制剂的制备方法，其特征在于：在第七步中，喷雾干燥的进风温度为165-170℃，排风温度为80-85℃，收集器内温度为45-48℃，雾化器转速为15000-17000 rpm。

8.一种用于脱除黄曲霉毒素的复合酶制剂，其特征在于：采用权利要求1~7任一权利要求所述的制备方法制得。