[发明专利]一种用于脱除黄曲霉毒素的复合酶制剂及其制备方法

说明书

一种用于脱除黄曲霉毒素的复合酶制剂及其制备方法，发酵菌种为黄孢原毛平革菌、污叉丝孔菌、云芝、密黏褶菌的混合菌种，通过固体发酵代谢产生具有脱除黄曲霉毒素功能的复合胞外酶，使用柠檬酸‑柠檬酸钠缓冲液浸泡固体发酵成品，经过压滤、超滤浓缩、喷雾干燥，得到复合酶制剂产品。本发明综合四种微生物表达胞外酶的酶学特征，配制固体发酵培养基，诱导发酵，获得胞外复合酶制剂产品，制备出分解黄曲霉毒素的复合酶制剂产品具有成本较低，安全性好，催化效率较高的特点，可有效分解陈化粮乙醇发酵后的醪液中的黄曲霉毒素，广泛应用于动物饲料工业和食品工业等领域中的黄曲霉毒素脱除。

技术领域

本发明涉及一种用于脱除黄曲霉毒素的复合酶制剂及其制备方法，属于食品生物技术领域。

背景技术

黄曲霉毒素（Aflatoxion，AFT）是黄曲霉(Aspergillus flavus)与寄生曲霉（Aspergillus parasiticus）产生的次级代谢产物，是一类具有二氢呋喃杂氧萘环结构的衍生物的总称，常见的有AFB₁、AFB₂、AFG₁、AFG₂、AFM₁、AFM₂、AFB_2a、AFGX、AFBM_2a、AFGM_2a等几种。这类毒素因含有大环共轭体系，稳定性非常好，分解温度高达280℃。在各种黄曲霉毒素中，以AFB₁存在最多，致突变性最强，通常所说的AFT即是指AFB₁。在各类食品中AFT污染极其常见，具有较强的致癌性、基因毒性、皮肤毒性、致畸性、肾毒性及肝毒性。在我国，谷物、饲料、食品等黄曲霉毒素的感染状况较为严重，对河南、山东、湖北、安徽4省的调查发现饲料中曲霉菌检出率为75.5%，而在全国28个省市区的调查，谷物、饲料中共分离鉴定出73种霉菌，其中检出率最高的是曲霉属，为100%。

黄曲霉毒素去毒方法包括氨化法、碱法、高温法、氧化法和吸附法等，这些方法处理不稳定、营养成分破坏较大，降低感官品质，黄曲霉毒素容易恢复毒性，难以规模化生产。生物酶解毒能够维持被污染物的营养特性，且具有催化条件温和，作用机制明确，专一性强和转化效率高的特点。但是对于黄曲霉毒素，目前尚未找到能完全降解该毒素的菌株或物质，且用生物学方法降解黄曲霉毒素的实际生产应用少，鲜有关于生物酶降解黄曲霉毒素的报道。因此，需要高表达与黄曲霉毒素解毒相关酶量，开发出高活性、高纯度及复合型的新型解毒酶，是解决黄曲霉毒素污染的重要策略。

通过生物酶处理法对黄曲霉毒素进行脱毒后，不会破坏原有产品的品质，而且可能增加产品的营养价值，具有巨大的应用潜力，但是，目前现有的生物去毒法技术采用酶成分较单一，黄曲霉毒素属于脂溶性，属于水溶性的单一黄曲霉毒素分解酶与黄曲霉毒素结合效率低；单一黄曲霉毒素分解酶的作用机制虽明确，但是黄曲霉毒素分解酶在处理过程中容易被体系中物质吸附，损耗大，且分离纯化黄曲霉毒素分解酶的难度大，成本高，难以规模化实际生产。

发明内容

本发明目的在于提供一种用于脱除黄曲霉毒素的复合酶制剂及其制备方法。

为实现上述目的，本发明提供的技术方案是：一种用于脱除黄曲霉毒素的复合酶制剂的制备方法，包括下列步骤：

第一步：在无菌环境中，挑取保藏状态下的黄孢原毛平革菌、污叉丝孔菌、云芝、密黏褶菌，分别接种于种子培养基，然后在温度28-32℃、转速150-280rpm的条件下，培养30-60h，获得黄孢原毛平革菌基础菌种、污叉丝孔菌基础菌种、云芝基础菌种和密黏褶菌基础菌种；

第二步：在无菌环境中，将所述黄孢原毛平革菌基础菌种、污叉丝孔菌基础菌种、云芝基础菌种和密黏褶菌基础菌种，按体积比1：20-30分别转接到新的种子培养基，在温度28-32℃、转速150-280rpm的条件下，培养30-50h，获得黄孢原毛平革菌发酵菌种、污叉丝孔菌发酵菌种、云芝发酵菌种、密黏褶菌发酵菌种；