[发明专利]制备内标工作液的方法及其应用

权利要求书

1.一种制备内标工作液的方法，其特征在于，包括：

1)将同位素内标标准品与沉淀剂进行第一混合处理，以便得到混合液，

2)将所述混合液与双蒸水进行第二混合处理，以便得到所述内标工作液。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述沉淀剂为蛋白质沉淀剂；

任选地，所述沉淀剂为磺基水杨酸；

任选地，所述沉淀剂为固体，所述沉淀剂预先用双蒸水进行溶解，以便获得沉淀剂溶液，所述沉淀剂溶液的浓度为4～12mM；

任选地，所述同位素内标准品与所述磺基水杨酸的摩尔比为1:(800～2400)；

任选地，所述同位素内标标准品预先使用甲醇进行溶解处理，以便获得同位素内标标准液；

任选地，所述同位素内标标准液的浓度为1～10μM；

任选地，所述同位素内标标准液与所述沉淀剂溶液的体积比为1：(1～3)，优选为1:1；

任选地，所述混合液与所述双蒸水的体积比为1：(5～10)，优选为1：6；

任选地，所述第一～第二混合处理是在涡旋的条件下进行1min；

任选地，所述同位素内标标准品包括选自同位素标记的胆酸、鹅脱氧胆酸、脱氧胆酸、石胆酸、熊脱氧胆酸、甘氨胆酸、甘氨鹅脱氧胆酸、甘氨脱氧胆酸、甘氨石胆酸、甘氨熊脱氧胆酸、牛磺胆酸、牛磺鹅脱氧胆、牛磺脱氧胆酸、牛磺石胆酸以及牛磺熊脱氧胆的至少之一。

3.一种内标工作液，其特征在于，包括同位素内标标准品以及沉淀剂，所述同位素内标标准品与沉淀剂的摩尔比为1:(800～2400)，所述同位素内标标准品的浓度为1～10μM，所述沉淀剂的浓度为4～12mM，所述沉淀剂不与同位素内标标准品相互作用。

4.根据权利要求3所述的内标工作液，其特征在于，所述同位素内标标准品包括选自同位素标记的胆酸、鹅脱氧胆酸、脱氧胆酸、石胆酸、熊脱氧胆酸、甘氨胆酸、甘氨鹅脱氧胆酸、甘氨脱氧胆酸、甘氨石胆酸、甘氨熊脱氧胆酸、牛磺胆酸、牛磺鹅脱氧胆、牛磺脱氧胆酸、牛磺石胆酸以及牛磺熊脱氧胆的至少之一；

任选地，所述沉淀剂为蛋白质沉淀剂；

任选地，所述沉淀剂为磺基水杨酸。

5.一种检测待测样品中胆汁酸的方法，其特征在于，包括：

1)将根据权利要求1或2所述的方法制备得到的内标工作液或权利要求3或4所述的内标工作液与待测样品进行混合、离心处理，以便获得上清液，

2)将所述上清液进行液相色谱串联质谱或质谱检测，

3)基于液相色谱串联质谱或质谱检测结果，确定胆汁酸的种类和/或含量。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述内标工作液与所述待测样品的体积比为1：(4～8)；

任选地，所述离心处理是在转速为4000rpm的条件下进行20min；

任选地，所述待测样品为血浆；

任选地，所述液相色谱柱为C8色谱柱；

任选地，所述质谱的离子源参数为ion spray voltage 5500V、source temperature600℃、CUR 20.0、GS1 60.0和GS2 40.0；

任选地，所述高效液相色谱检测的流动相为流动相A和流动相B，所述流动相A包括纯水、流动相添加剂A以及流动相添加剂B，所述流动相B包括乙腈、甲醇、流动相添加剂A以及流动相添加剂B；

任选地，所述流动相添加剂A包括5～20mM的醋酸铵；

任选地，所述流动相添加剂B包括0.1％～1％的氨水；

优选地，所述纯水、流动相添加剂A以及流动相添加剂B的体积比为500：0.5：0.5，

所述乙腈、甲醇、流动相添加剂A以及流动相添加剂B的体积比为350：150：0.5：0.5。

7.一种试剂盒，其特征在于，包括：同位素内标标准品以及沉淀剂。