[发明专利]制备内标工作液的方法及其应用

说明书

本发明公开了一种制备内标工作液的方法。该方法包括：1)将同位素内标标准品与沉淀剂进行第一混合处理，以便得到混合液，2)将所述混合液与双蒸水进行第二混合处理，以便得到所述内标工作液。该方法，操作简单，且根据该方法制备获得的内标工作液可用于后续检测血浆中的胆汁酸的种类和/或含量，且检测结果准确、特异性强。

技术领域

本发明涉及生物检测领域，具体地，本发明涉及制备内标工作液的方法及其应用，更具体地，本发明涉及制备内标工作液的方法、内标工作液、检测胆汁酸的方法、试剂盒及其内标工作液在制备试剂盒中的用途。

背景技术

胆汁酸(Bile acid)是在肝脏中由胆固醇合成的一类两性甾醇类化合物，是胆汁的重要组成成分，胆汁中主要含有15种胆汁酸，包括胆酸(CA)、石胆酸(LCA)、脱氧胆酸(DCA)、鹅脱氧胆酸(CDCA)、熊脱氧胆酸(UDCA)5种及其与甘氨结合的5种和其与牛磺结合的5种。

胆汁酸在促进脂质物质(包括脂溶性维生素及其它非极性物质)的消化吸收，调节机体脂肪代谢发挥重要作用。胆汁酸合成、分泌、重吸收及加工转化等均与肝、胆、肠等脏器官密切相关，因此，监测人体内胆汁酸水平对肝胆肠的疾病诊断有着十分重要的意义。

目前在肝胆肠疾病诊断与监测中常以总胆汁酸(胆酸、鹅脱氧胆酸、脱氧胆酸、熊脱氧胆酸、石胆酸5种)水平作为参考指标。然而随着精准医疗快速发展，总胆汁酸水平的监测无法满足对相关疾病的精准诊断和对预期相关疾病的有效纠正，对相关疾病的精准诊断常需要监测人体内各单个胆汁酸水平甚至更多种类的胆汁酸水平，由此精准判别相关疾病从而更有效的给予诊断。例如，妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)主要由甘氨胆酸水平升高引起，四川上海等地综合发病率13％，复发率70％，如果使治疗方式由降低体内总胆汁酸水平优化为降低甘氨胆酸水平，治疗效果将更为明显，因此，快速诊断与监测人体内每种胆汁酸水平的技术尤为重要。

胆汁酸的临床检测方法主要有三类：层析法、标记免疫分析法和酶法分析，酶法中又可分为酶荧光法、酶循环法和酶比色法，上述方法只能检测血清中总胆汁酸的浓度，而不能检测出单个胆汁酸的含量。临床上偶联黄递酶比色法以及在此基础上增加一个3α-羟类固醇脱氢酶的偶联比色法能快速检测总胆汁酸浓度，此类方法应用最为广泛，但这类方法生成的甲色素有吸附现象，对结果干扰较大，且对仪器比色皿及管道有污染损害现象。而液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)可同时精准定量测定血浆中各种胆汁酸的浓度，可检测血浆中每种胆汁酸，并进行定性定量分析，满足临床血样中胆汁酸含量的测定要求，具有高通量、快速、低成本的优点。在临床实践和科研实践中有较高应用价值。

发明内容

现有国内试剂盒多采用的酶循环法技术测定血清总胆汁酸浓度，但是此类方法存在交叉反应、特异性低、结果干扰大，仪器污染严重，只能检测总胆汁酸浓度，不能对单个胆汁酸浓度进行特异性检出的问题，而虽然采用液相色谱串联质谱或质谱检测(LC-MS/MS)法检测胆汁酸，解决了酶循环法中的不能特异性检测胆汁酸的问题，但仍然存在着在样品前处理过程中需氮气吹和复溶的浓缩过程，操作复杂，所需时间长等问题。