[发明专利]一种基于HPLC-MS/MS技术检测NMDA受体拮抗剂JCC-02血药浓度的方法

权利要求书

1.一种基于HPLC-MS/MS技术检测NMDA受体拮抗剂JCC-02血药浓度的方法，其特征在于，待测样品预处理后，在混合流动相梯度洗脱下，经高效液相色谱柱分离后，采用二级质谱检测器检测，内标法进行定量分析，包括以下步骤：

(1)大鼠血浆样品的预处理：

在含有JCC-02的SD大鼠血浆中，依次加入内标工作溶液、甲醇和乙腈，涡旋后离心，并取上清，加流动相即得；

(2)待测样品和内标分离：

采用Venusil ASB C8色谱柱，柱温：40℃，通用型二元泵和自动进样器进行色谱分离；采用含0.1％甲酸的乙腈-水混合溶液为流动相，进行梯度洗脱；

(3)二级质谱检测

采用Agilent 1290 Infinity高效液相色谱仪，串联AB API4000三重四级杆串联质谱仪为分析检测设备；质谱仪采用电喷雾ESI离子源，多反应监测分析模式MRM进行正离子检测；定量分析的离子分别为：JCC-02：m/z 333.20→162.9，IS：m/z 324.2→110.0，碰撞能量分别为：JCC-02：29eV，IS：31eV；

所述内标工作溶液为格列齐特的醇溶液，加样浓度为7μg·mL^-1；

所述流动相A为含0.1％甲酸的乙腈溶液；流动相B为含0.1％甲酸的水溶液；洗脱方式为梯度洗脱；流速：0.3mL·min^-1；

其中，洗脱梯度程序：

所述质谱条件中，干燥气：N₂；离子源温度500℃；离子源电压3500V；气帘气：Cur；20psi；雾化气：GS1；40psi；干燥气：GS2；40psi。

2.根据权利要求1所述的一种基于HPLC-MS/MS技术检测NMDA受体拮抗剂JCC-02血药浓度的方法，其特征在于，血浆样品是采用8周体成熟的SD大鼠，血浆样品量为0.4mL，经高速离心机离心，取上清液制成；取样量为100μL。

3.根据权利要求1所述的一种基于HPLC-MS/MS技术检测NMDA受体拮抗剂JCC-02血药浓度的方法，其特征在于，流动相配制方法：将乙腈或100mL水加入100mL容量瓶中，加入100μL甲酸，定容，涡旋混匀后即得。

4.根据权利要求1所述的一种基于HPLC-MS/MS技术检测NMDA受体拮抗剂JCC-02血药浓度的方法，其特征在于，JCC-02系列标准溶液配制方法：精密称定JCC-02对照品10mg于10mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容，超声2min至药物完全溶解，即得1mg·mL^-1的JCC-02储备液；再用甲醇将其逐级稀释至各所需浓度，即得到各浓度的JCC-02系列标准溶液。

5.根据权利要求1所述的一种基于HPLC-MS/MS技术检测NMDA受体拮抗剂JCC-02血药浓度的方法，其特征在于，内标工作溶液配制方法：精密称定格列齐特对照品10mg于10mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容，超声2min至药物完全溶解，即得1mg·mL^-1的格列齐特内标储备液；再用甲醇将其稀释至所需浓度7μg·mL^-1，即得内标工作溶液。

6.根据权利要求1所述的一种基于HPLC-MS/MS技术检测NMDA受体拮抗剂JCC-02血药浓度的方法，其特征在于，血浆样品上机检测的进样量为2μL。