[发明专利]一种基于HPLC-MS/MS技术检测NMDA受体拮抗剂JCC-02血药浓度的方法

说明书

本发明提供了一种基于HPLC‑MS/MS技术检测NMDA受体拮抗剂JCC‑02血药浓度的方法，涉及药物分析领域，包括以下步骤：在JCC‑02灌胃给药后的SD大鼠血浆中，依次加入甲醇、乙腈和内标工作溶液，涡旋取上清用流动相溶解后进样，所述内标工作溶液为格列齐特的甲醇溶液；采用液质联用技术，乙腈‑甲酸水混合溶液为流动相进行梯度洗脱，Venusil ASB C8色谱柱进行色谱分离，二级质谱检测器检测，进行定量分析。该方法专属性强，灵敏度高，样品取样量少，预处理简单、快速，分析周期短，经方法学验证此方法准确、可靠，适用于SD大鼠血浆中JCC‑02的药物浓度测定和药代动力学研究。

技术领域

本发明属于药物分析领域，尤其是涉及一种基于HPLC-MS/MS技术检测NMDA受体拮抗剂JCC-02血药浓度的方法。

背景技术

阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是一种不可逆的神经进行性退变，临床表现为渐进性记忆障碍、失语、失用、失认、视空间技能损害、执行功能障碍以及人格和行为改变等，近年来其发病率呈逐年上升的趋势。目前，N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体拮抗剂类治疗药物上市的只有美金刚一种，用于中、重度AD的治疗，这对于复杂的临床需求是远远不够的，因此近年来NMDA受体拮抗剂类治疗药物的研究与开发已成为人们关注的热点。

根据美金刚的化学结构进行修饰，研制出了新型NMDA受体拮抗剂候选化合物JCC-02，化学结构式见图1，其初始药理活性已被证实，但尚未进行临床前药代动力学研究。目前，还未发现有关JCC-02生物样品中药物浓度定量分析方法和临床前药代动力学特征的国内外文献报道。

因此，建立一种灵敏、准确、快速的痕量定量分析方法，并应用于JCC-02在大鼠体内的药代动力学研究，将会为今后的药理、毒理、药剂学等的研究提供科学依据和数据支持，对新药的研发也具有积极促进作用。

发明内容

本发明的目的是建立一个操作简便、快速、准确、血浆用量少的能够测定SD大鼠灌胃给药后化合物JCC-02的血药浓度方法。

发明人经过多次不同条件的实验结果对比和优化，最终筛选出了本发明的实验条件。本发明是一种基于HPLC-MS/MS技术检测NMDA受体拮抗剂JCC-02血药浓度的方法，其特征在于，待测样品预处理后，在混合流动相梯度洗脱下，经高效液相色谱柱分离后，采用二级质谱检测器检测，内标法进行定量分析。该实验条件专属性强、准确度高、重现性好，可以得到满意的峰形及色谱保留时间，使分析时间相对较短。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

(1)大鼠血浆样品的预处理：

采用8周体成熟的SD大鼠，经时经眼眶静脉丛下取血0.4mL，经高速离心机离心取上清液制成；-70℃深低温冰箱冷冻保存待测；

在1.5mL离心管中依次加入溶解后待测血浆、内标工作溶液、甲醇(或JCC-02标准溶液)各10μL，涡旋10s，再加入乙腈沉淀剂40μL，涡旋30s后10000r·min^-1离心10min，取上清液20μL于新离心管，加入180μL流动相，涡旋10s，即得；

(2)待测样品和内标分离：

液相条件是采用Venusil ASB C₈色谱柱(2.1×50mm，3μm)，柱温：40℃，通用型二元泵(G4220A)和自动进样器(G4226A)进行色谱分离，流动相为含0.1％甲酸的乙腈-水混合溶液，进行梯度洗脱，洗脱程序见表1，流速为0.3mL·min^-1；

表1洗脱梯度程序

(3)二级质谱检测