[发明专利]一种体外诱导扩增高杀伤活性γδT细胞的方法

权利要求书

1.一种体外诱导扩增高杀伤活性γδ T细胞的方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）制备PBMCs：取外周血，肝素抗凝，采用淋巴细胞分离液分离获得PBMCs，并用PBS缓冲液重悬洗涤细胞两次；

（2）γδ T细胞的刺激培养：向无血清培养基加入5-10v%的自体血浆，同时按照每毫升无血清培养基加1 μL γδ T细胞刺激因子的计量加入γδ T细胞刺激因子，得到γδ T细胞刺激培养基，使用γδ T细胞刺激培养基悬起PBMCs，并调整密度至1-3×10⁶个细胞/mL，接种于培养瓶中，并置于37℃、5%CO₂的条件下培养；

（3）制备γδ T细胞扩增培养基：按照每毫升培养基加1 μL γδ T细胞扩增因子的计量，向无血清培养基中加入γδ T细胞扩增因子，得到γδ T细胞扩增培养基；

（4）扩增培养：待步骤（2）中培养至第3 d时，离心去除刺激培养基，使用γδ T细胞扩增培养基将细胞密度调整到3×10⁶个细胞/mL，以后每2-3 d根据细胞密度补液，直至培养至第7-9 d，然后加入尼克酰胺，使其在培养基中的终浓度为5 mM，以后每2-3 d补加γδ T细胞扩增培养基使细胞密度保持在3×10⁶个细胞/mL，并补加尼克酰胺，使其在培养基中的终浓度为5 mM；在37℃、5％CO₂的条件下培养10-14 d，获得γδ T细胞；

步骤（2）中，所述γδ T细胞刺激因子包含如下组分：5 mM的唑来膦酸，6×10⁵ IU/mL的IL-2，10 μg/mL的IL-7，10 μg/mL的IL-15；

步骤（3）中，所述γδ T细胞扩增因子包含如下组分：6×10⁵ IU/mL的IL-2，10 μg/mL的IL-7，10 μg/mL的IL-15。

2.如权利要求1所述体外诱导扩增高杀伤活性γδ T细胞的方法，其特征在于，步骤（3）中，所述无血清培养基中，加有5-10v%自体血浆。