[发明专利]一种暗褐网柄牛肝菌菌种制备方法

权利要求书

1.一种暗褐网柄牛肝菌菌种制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

(1)制备暗褐网柄牛肝菌母种：取暗褐网柄牛肝菌菌株接种于斜面培养基上，得母种；

(2)培养摇瓶菌种：取步骤(1)制备的斜面母种，连带斜面培养基接种到装有液体摇瓶培养基的培养瓶中，培养得到摇瓶菌种；

(3)培养发酵罐栽培种：将步骤(2)培养的摇瓶菌种接种到装有发酵培养基的发酵罐中，培养得栽培种；所述的发酵培养基包含以下成分，且成分比例为：每1000ml水配糖蜜20～30g、蔗糖5～10g、豆粕粉10～20g、KH₂PO₃ 1～2g、MgSO₄ 1～2g、酵母浸膏1～3g、消泡剂2～5g，PH值为5.8～6.8。

2.权利要求1所述的一种暗褐网柄牛肝菌菌种制备方法，其特征在于：所述的发酵培养基的制备方法为：将所述的糖蜜、豆粕粉、酵母浸膏和消泡剂按照所述的比例加入到水中稀释、并打浆，得到混合浆液，再加入蔗糖、KH₂PO₃、MgSO₄搅拌至完全溶解，加水定容，调整PH值至5.8～6.8，得发酵培养基。

3.如权利要求1或2所述的一种暗褐网柄牛肝菌菌种制备方法，其特征在于：所述的发酵培养基在暗褐网柄牛肝菌液体菌种培养和/或发酵罐发酵培养中的用途。

4.如权利要求1或2所述的一种暗褐网柄牛肝菌菌种制备方法，其特征在于：

所述步骤(1)的培养条件为：在28℃～30℃恒温条件下，暗光培养25～28天，得母种；

所述步骤(2)中，将步骤(1)制备的斜面母种连带斜面培养基接种到装有液体摇瓶培养基的培养瓶之前，先将斜面母种连带斜面培养基粉碎，接种量为液体摇瓶培养基体积百分比的0.5～2％，培养条件为：28℃～30℃恒温，130～170r/min回旋式震荡速率，暗光，二氧化碳浓度900～1500ppm；培养6～8天得摇瓶菌种；

所述步骤(3)中，接种量为发酵培养基体积百分比0.5～2％，培养条件为：28～30℃恒温，压力0.02～0.05MPa，搅拌速率100～150r/min，暗光；培养5～7天得栽培种。

5.如权利要求4所述的一种暗褐网柄牛肝菌菌种制备方法，其特征在于：步骤(1)所述的斜面培养基包含以下成分，且成分之间比例为：每1000ml水配糖蜜20～30g、蔗糖5～10g、KH₂PO₃ 1～2g、MgSO₄ 1～2g、琼脂16～18g、酵母浸膏1～3g，PH值为5.8～6.8。

6.如权利要求4或5所述的一种暗褐网柄牛肝菌菌种制备方法，其特征在于：步骤(2)中所述的液体摇瓶培养基包含以下成分，且成分比例为：每1000ml水配糖蜜20～30g、蔗糖5～10g、KH₂PO₃ 1～2g、MgSO₄ 1～2g、酵母浸膏1～3g，PH值为5.8～6.8。

7.如权利要求4所述的一种暗褐网柄牛肝菌菌种制备方法，其特征在于：所述的斜面培养基、摇瓶培养基、发酵培养基在使用之前还需要进行灭菌，其中斜面培养基115℃灭菌30分钟，摇瓶培养基115℃灭菌30分钟，发酵培养基115～125℃灭菌30～60分钟。

8.如权利要求4所述的一种暗褐网柄牛肝菌菌种制备方法，其特征在于：步骤(1)中所述的暗褐网柄牛肝菌菌株可用组织分离法分离暗褐网柄牛肝菌子实体组织块，也可用低温保藏的菌株菌丝块。

9.如权利要求4所述的一种暗褐网柄牛肝菌菌种制备方法，其特征在于：步骤(3)中所述的发酵罐为气升式发酵罐，发酵罐容量20～2000L。

10.如权利要求8所述的一种暗褐网柄牛肝菌菌种制备方法，其特征在于：步骤(3)中当所述的发酵罐容量低于或等于300L时，可直接接入步骤(2)培养的摇瓶菌种；所述的发酵罐容量超过300L时，使用种子发酵罐进行扩繁后接入步骤(2)培养的摇瓶菌种，所述的扩繁为：选用发酵罐10％容积的种子罐，将步骤(2)中培养的摇瓶菌种接种到种子罐，接种量及培养条件同步骤(3)，待5～7天长满后接入发酵罐中，培养5天成熟即得菌种。