[发明专利]一种暗褐网柄牛肝菌菌种制备方法

说明书

本发明针对现有技术中存在的缺陷提供了一种暗褐网柄牛肝菌的制备方法。该方法提供了包含从母种、摇瓶至发酵罐培养的制备过程，并提出了具有较好技术效果的斜面培养基、摇瓶培养基和发酵培养基独特的组成，降低了制种成本和培养基制备的繁琐程度，提高了菌种培养的稳定性，且菌丝生长速度快，产量高，菌球大小均一，菌液澄清透明，菌株活性强，接种栽培基20～25天可以长满。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是暗褐网柄牛肝菌菌种培养方法。

背景技术

暗褐网柄牛肝菌是一种珍稀食用菌，其味道鲜美，营养丰富，作为一种食用菌具有广阔的市场前景。然而，自然生长的此种菌子数量非常有限，为满足消费者对于暗褐网柄牛肝菌的需求，需要研制出一种人工培植方法。随着近几年针对暗褐网柄牛肝菌栽培种植技术研究的发展，目前已可用袋栽和瓶栽的方法进行中等规模的室内栽培，大棚栽培和林下仿生栽培也有较大进展。

然而，现有技术仍未能克服技术难题、实现大规模种植。目前暗褐网柄牛肝菌菌种培养方法还是采用以木屑、谷粒为主的固体培养方法，固体菌种培养周期长、成本高、污染检测难，发菌速度慢，出菇整齐度差，而且暗褐网柄牛肝菌固体菌种需要40～50天的培养周期，污染风险高；所以，液体菌种稳定培养是实现大规模栽培的关键前提之一，针对暗褐网柄牛肝菌的液体菌种培养目前也有了一些进展，然而，目前暗褐网柄牛肝菌液体菌种培养方法还是以实验型培养方法为主，其技术方案本身存在的不足，例如培养基制备工序复杂，原料成本高，高接种量，批次间稳定性差等因素限制该方法在大规模栽培中的应用，导致其尚未能推广至工厂化生产，

因此，迫切需要一种更简便高效的、能够实现工厂化栽培的暗褐网柄牛肝菌制备方法。

发明内容

针对现有技术中存在的缺陷，本发明提出了一种暗褐网柄牛肝菌从母种、摇瓶至发酵罐培养的制备方法，该方法提供了从母种、摇瓶至发酵罐培养的制备过程，并提出了具有较好技术效果的斜面培养基、摇瓶培养基和发酵培养基独特的组成，降低了制种成本和培养基制备的繁琐程度，提高了菌种培养的稳定性，且菌丝生长速度快，产量高，菌球大小均一，菌液澄清透明，菌株活性强，接种栽培基20～25天可以长满。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种暗褐网柄牛肝菌菌种制备方法，包括以下步骤：

(1)制备暗褐网柄牛肝菌母种：取暗褐网柄牛肝菌菌株接种于斜面培养基上，得母种；

(2)培养摇瓶菌种：取步骤(1)制备的斜面母种，连带斜面培养基接种到装有液体摇瓶培养基的培养瓶中，培养得到摇瓶菌种；

(3)培养发酵罐栽培种：将步骤(2)培养的摇瓶菌种接种到装有发酵培养基的发酵罐中，培养得栽培种；所述的发酵培养基包含以下成分，且成分比例为：每1000ml水配糖蜜20～30g、蔗糖5～10g、豆粕粉10～20g、KH₂PO₃1～2g、MgSO₄1～2g、酵母浸膏1～3g、消泡剂2～5g，PH值为5.8～6.8。

进一步地，所述的发酵培养基的制备方法为：将所述的糖蜜、豆粕粉、酵母浸膏和消泡剂按照所述的比例加入到水中稀释、并打浆，得到混合浆液，再加入蔗糖、KH₂PO₃、MgSO₄搅拌至完全溶解，加水定容，调整PH值至5.8～6.8，得发酵培养基。

进一步地，所述的发酵培养基在暗褐网柄牛肝菌液体菌种培养和/或发酵罐发酵培养中的用途。

进一步地，所述步骤(1)的培养条件为：在28℃～30℃恒温条件下，暗光培养25～28天，得母种；