[发明专利]一种诱导牙鲆基因突变的方法

权利要求书

1.一种诱导牙鲆基因突变的方法，其特征在于，所述方法采用常温等离子体，对牙鲆精子或牙鲆受精卵进行照射，

当对受精卵进行照射时，所述等离子体的照射功率为120~160W，所述照射时间为20~25min，照射间距≤2mm；

当对精子进行照射时，所述等离子体的照射功率为160~200W，所述照射时间为4~10min，照射间距≤2mm。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，当对受精卵进行照射时，所述方法包括以下步骤：

1）采集新鲜的牙鲆精子和卵子，并放置在不同的容器中；

2）用稀释液对所述精子进行6~40倍的稀释；

3）将稀释后的精子与卵子进行混合，搅拌均匀后加入海水，得到经海水激活的精卵混合物，将所述精卵混合物在海水中孵化60分钟，得到受精卵；

4）将所述受精卵转移至培养皿中，在常温下采用等离子体进行照射，然后将所述受精卵转移至孵化缸内进行孵化。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤3）和步骤4）中的孵化温度为15~20℃。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤3）和步骤4）中的孵化温度为17℃。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述方法还包括步骤4）突变率检测：受精卵孵化后得到鱼苗，在3月龄时剪取鱼的鳍条，通过高通量全基因组重测序的方法，获得每一鱼苗个体的SNP数和InDel数，将SNP数和InDel数之和除以全基因组碱基数，得到突变率。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，当对精子进行照射时，所述方法包括以下步骤：

1）采集新鲜的牙鲆精子和卵子，并放置在不同的容器中；

2）用稀释液对所述精子进行6~40倍的稀释，然后将稀释后的精子转移至培养皿中，在常温下采用等离子体进行照射；

3）将照射后的精子与卵子进行混合，搅拌均匀后加入海水，激活卵子完成人工授 精，得到受精卵；

4）将所述受精卵转移至孵化缸内进行孵化。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤3）和步骤4）中的孵化温度为15~20℃。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤3）和步骤4）中的孵化温度为17℃。

9.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述方法还包括步骤4）突变率检测：受精卵孵化后得到鱼苗，在3月龄时剪取鱼的鳍条，通过高通量全基因组重测序的方法，获得每一鱼苗个体的SNP数和InDel数，将SNP数和InDel数之和除以全基因组碱基数，得到突变率。