[发明专利]一种诱导牙鲆基因突变的方法

说明书

本发明涉及一种诱导牙鲆基因突变的方法，所述方法采用常温等离子体，对牙鲆精子或牙鲆受精卵进行照射。优选常温等离子体的照射功率为120～200W，照射时间为1.5～30min，照射间距≤2mm。本发明采用常温等离子体对牙鲆的受精卵或精子进行诱变，均能产生一定比例的突变个体。该方法操作简便，安全可靠，可成功用于牙鲆和其它鱼类的育种工作，大幅增加突变率、提升新种质资源创制的效率。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种诱导牙鲆发生基因突变的方法。

背景技术

牙鲆是我国重要的海水养殖鱼类，具有肉质细嫩鲜美，经济价值高等特点，深受消费者的喜爱。良种是水产养殖业健康可持续发展的重要基础保障，我国的育种工作者选育出了多个牙鲆优良新品种，为牙鲆养殖业的发展提供了种源支撑。近年来，随着过度捕捞和环境污染，造成牙鲆自然资源衰减，致使可供选育所用的种质资源在数量和遗传多样性上呈现出大幅度的下降。因此，为了牙鲆良种选育以及养殖业的可持续发展，必须对其种质资源进行高效的创制。

诱变法是进行种质资源创新的一种有效手段。目前用于鱼类的诱变方法主要为射线诱变和化学诱变，所采用的诱变源主要包括伽马射线、X射线以及N-乙基-N-亚硝基脲(N-ethyl-N-nitrosourea，简称ENU)。其中，伽马射线和X射线具有辐射性，设备昂贵，且需要专门的保护设施以确保安全性。ENU是一种化学诱变剂，它通过对基因组DNA碱基的烷基化修饰，诱导DNA在复制时发生错配而产生突变。这种物质是2A类致癌物，会对人体的健康造成巨大危害。同时，上述几种诱变源的诱变效率都较低。因此，需要提供一种用于牙鲆的安全可靠且诱变率高的诱变方法。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种诱导牙鲆基因突变的方法。

为实现上述目的，本发明的技术方案如下：

本发明涉及一种诱导牙鲆基因突变的方法，所述方法采用常温等离子体，对牙鲆精子或牙鲆受精卵进行照射。

优选地，所述常温等离子体的照射功率为120～200W，照射时间为1.5～30min，照射间距≤2mm。

优选地，当对受精卵进行照射时，所述等离子体的照射功率为120～160W，所述照射时间为20～25min。

优选地，当对精子进行照射时，所述等离子体的照射功率为160～200W，所述照射时间为2～10min。

优选地，当对受精卵进行照射时，所述方法包括以下步骤：

1)采集新鲜的牙鲆精子和卵子，并放置在不同的容器中；

2)用稀释液对所述精子进行6～40倍的稀释；

3)将稀释后的精子与卵子进行混合，搅拌均匀后加入海水，得到经海水激活的精卵混合物，将所述精卵混合物在海水中孵化60分钟，得到受精卵；

4)将所述受精卵转移至培养皿中，在常温下采用等离子体进行照射，然后将所述受精卵转移至孵化缸内进行孵化。

优选地，步骤3)和步骤4)中的孵化温度为15～20℃，优选为17℃。

优选地，当对精子进行照射时，所述方法包括以下步骤：

1)采集新鲜的牙鲆精子和卵子，并放置在不同的容器中；

2)用稀释液对所述精子进行6～40倍的稀释，然后将稀释后的精子转移至培养皿中，在常温下采用等离子体进行照射；

3)将照射后的精子与卵子进行混合，搅拌均匀后加入海水，激活卵子完成人工受精，得到受精卵；

4)将所述受精卵转移至孵化缸内进行孵化。