[发明专利]一种甘蔗线条花叶病毒双抗体夹心酶联免疫检测试剂盒及制备与检测方法

说明书

本发明公开了一种甘蔗线条花叶病毒双抗体夹心酶联免疫检测试剂盒及制备与检测方法，其包括ELISA用微孔板，酶标抗体，缓冲液，显色液，终止液，其中微孔板上包被有SCSMV特异的多克隆抗体，酶标抗体为辣根过氧化酶标记得SCSMV特异性多克隆抗体。本发明采用的免疫原为基因工程表达的SCSMV外壳蛋白抗原。本发明还公开了一种甘蔗线条花叶病毒的检测方法。本发明在血清学水平上为甘蔗线条花叶病毒的检测提供了一种快速、灵敏、简便的方法，并且经济实用，也为甘蔗生产中甘蔗线条花叶病毒的防治及其脱毒苗的制备提供了有效方法。

技术领域

本发明涉及植物病毒检测的生物技术产品领域，具体涉及一种可用于对甘蔗线条花叶病毒进行快速检测的双抗体夹心酶联免疫检测试剂盒(DAS-ELISA)，本发明还涉及该试剂盒的制备方法及检测方法。

背景技术

甘蔗花叶病(Sugarcane mosaic disease，SMD)是一类广泛发生在世界各大甘蔗产区的重要的甘蔗病害，主要症状表现为叶片呈黄绿相间、不规则的嵌纹、条斑或斑驳状，叶色较浅，生长势差、植株矮化，一般可引起10-40％的产量损失，糖份下降，该病害在云南、广西两省区甘蔗栽培区和国家甘蔗种质资源圃内广泛发生，严重的制约了两省区蔗糖产业的持续稳定发展。甘蔗花叶病病原复杂，可由多种病毒引起。目前为止，已明确鉴定出的病害病原有甘蔗花叶病毒(Sugarcane mosaic virus,SCMV)、高粱花叶病毒(Sorghum mosaicvirus,SrMV)和甘蔗条纹花叶病毒(Sugarcane streak mosaic virus,SCSMV)等3种病毒。

SCSMV属于马铃薯Y病毒科(Potyviridae)禾本科病毒属(Poacevirus)。该病毒基因组约为10kb，编码一个多聚蛋白，经蛋白酶水解切割后可产生10个成熟的蛋白质，在P3蛋白氨基端有一个PIPO蛋白。SCSMV首先在甘蔗花叶病株上发现，自然条件下能够侵染甘蔗、高粱和一些禾本科杂草。2008-2012年，我们在云南省甘蔗产区首次发现SCSMV，后续调查发现，SCSMV云南省甘蔗主产区发生越来越普遍，部分地区呈现流行爆发趋势。因此，发展SCSMV的快速检测鉴定技术迫在眉睫，目前，SCSMV主要通过电镜技术、分子生物学技术进行检测，由于目前尚无SCSMV特异性抗血清，无法利用酶联免疫吸附法(ELISA)检测。

发明内容

为了克服上述缺陷，本发明内容提供一种用于甘蔗线条花叶病毒检测的准确高效、易于推广、经济实用的双抗体夹心酶联免疫检测试剂盒，以及该试剂盒的制备方法及检测方法。

为了实现上述发明目的，本发明采用的技术方案为：一种甘蔗线条花叶病毒双抗体夹心酶联免疫检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括SCSMV特异性多克隆抗体，SCSMV特异性多克隆抗体包被于多克隆抗体包被板上。

所述SCSMV特异性多克隆抗体的氨基酸序列为：

GTQPPQNQSSSPATTSSISSTTTSQVGSQTTGNLSNTVSQTMKSLYVPPLVKSLKTEAKAKQMMRYTPPQALISSSAASIRQFNDWANTAAEGYGKTIQQFTDEILPFWIYWCVVNGATEENKTKPKWTKAVLNLDGADGTEITVDENGPQVEFEMGPMYRNAKPGIRAIMRHFGELAYKWVRFSVRSGKPIIPHNAVKAGLTTPEFYPCCIDFVMVNILSPAEIDVRNQVINARTPRMGKPLFRHALRAGGDEDTDLRREDDANYGRTQIGGAHFGRAQH(SEQ ID No.3)。

所述试剂盒还包括辣根过氧化酶标记多克隆抗体、基因工程重组SCSMV外壳蛋白标准品、质控品。还包括辅助试剂：提取反应液、洗涤缓冲液、酶缓冲液、显色剂及反应终止液。