[发明专利]联合免疫效果早期快速评价方法中的试剂及其应用

权利要求书

1.一种改良型溶血素，其特征在于，所述溶血素包括以下组分：皂角苷、多聚甲醛、Triton X-100。

2.一种改良型溶血素，其特征在于，所述溶血素包括以下组分：5％(w/v)皂角苷，0.001％(v/v)Triton X-100，1.5％(v/v)多聚甲醛。

3.一种权利要求1或2所述的溶血素的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

(1)配置多聚甲醛溶液；

(2)配置好的多聚甲醛溶液中加入Triton X-100；

(3)步骤(2)的溶液中加入皂角苷，充分溶解；

优选地，所述方法包括如下步骤：

(1)配置100ml 1.5％多聚甲醛；

(2)配置好的100ml 1.5％多聚甲醛中加入Triton X-100使Triton X-100浓度0.001％；

(3)配置好的溶液中加入0.05克皂角苷，充分溶解。

4.一种流式细胞仪检测专用溶血方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

按照10:1体积比将稀释的权利要求1或2所述的溶血素加入到抗凝的外周血中，迅速震荡均匀，室温孵育20-30min，使红细胞完全溶解，保留白细胞，用于流式细胞仪检测；

优选地，所述方法包括如下步骤：

(1)取外周血样本，加入抗凝剂后室温存放用；

(2)取抗凝外周血100μl放入流式管中；

(3)加入相应的荧光抗体并混合均匀，室温避光孵育20-30分钟；

(4)加入1*权利要求1或2所述的溶血素1ml并迅速震荡均匀，室温放置5-10分钟。

5.根据权利要求4的方法，其特征在于，所述抗凝剂包括肝素、乙二胺四乙酸盐、枸橼酸盐、或草酸盐。

6.一种白细胞分群计数的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

(1)按照权利要求4或5所述的溶血方法进行溶血；

(2)离心，去除上清液；

(3)加入细胞染色缓冲液洗涤，离心，去除上清液；

(4)用固定液固定并并置于2-8℃避光保存，于48h内进行流式细胞仪白细胞分群计数分析。

7.根据权利要求6的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

(1)按照权利要求4或5所述的溶血方法进行溶血；

(2)1500r/min离心5min，去除上清液；

(3)加入1ml细胞染色缓冲液PBS洗涤，1500r/min离心5min，去除上清液；

(4)用400μl固定液固定并置于2-8℃避光保存，于48h内上机分析。

8.根据权利要求6或7所述的方法，其特征在于，所述固定液是多聚甲醛。

9.权利要求1或2所述的溶血素在制备分离血液中中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞的产品中的应用。

10.权利要求1或2所述的溶血素在制备联合免疫效果早期快速评价的产品中的应用。