[发明专利]一种非病毒转染试剂及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种非病毒转染试剂，其特征在于，包括：终浓度为10～50ng/ml的阳离子聚合物、终浓度为0.1～20μg/ml的重组多肽和终浓度为5～80ng/ml的阳离子脂质体。

2.根据权利要求1所述的非病毒转染试剂，其特征在于，所述非病毒转染试剂的阳离子聚合物是基于质子海绵效应的一种或至少两种阳离子聚合物。

3.根据权利要求3所述的非病毒转染试剂，其特征在于，所述阳离子聚合物包括聚乙烯亚胺、聚赖氨酸、聚酰胺基胺或壳聚糖。

4.根据权利要求1所述的非病毒转染试剂，其特征在于，所述病毒包膜糖蛋白为树状病毒包膜糖蛋白。

5.根据权利要求4所述的非病毒转染试剂，其特征在于，所述重组病毒包膜糖蛋白为重组gB多肽；所述重组gB多肽的氨基酸序列为SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2所示。

6.根据权利要求1所述的非病毒转染试剂，其特征在于，所述阳离子脂质体为双十二烷基二甲基溴化铵DDAB或胺类阳离子类脂质体。

7.一种权利要求1-6任意一项所述的非病毒转染试剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)、配制阳离子聚合物溶液；

2)、阳离子脂质体/病毒包膜糖蛋白复合物的制备；

3)、转染试剂的制备。

8.根据权利要求7所述的非病毒转染试剂的制备方法，其特征在于，所述步骤1)中阳离子聚合物溶液配制操作包括：

(1)HBS(pH7.4)的配制：将NaCl溶解于超纯水，加入HEPES，调pH值，定容，过滤后储存于4℃；

(2)将阳离子聚合物粉末溶解于步骤(1)配制的HBS(pH7.4)中，震荡均匀，配置成所需浓度的PEI溶液，过滤，储存于4℃。

9.根据权利要求7所述的非病毒转染试剂的制备方法，其特征在于，所述步骤2)中阳离子脂质体/病毒包膜糖蛋白复合物的制备，包括：取等量阳离子脂质体和病毒包膜糖蛋白溶解于1×HBS(pH7.4)中，震荡均匀，过滤，即得到阳离子脂质体/重组多肽复合物溶液，储存于4℃备用。

10.一种利用权利要求1-6任意一项所述的非病毒转染试剂或权利要求7-9任意一项所述的制备方法所制备得到的转染试剂进行转染的方法，其特征在于，包括：

(1)取一管，编号为1号管：加入权利要求1-6任意一项所述的转染试剂或权利要求7-9任意一项所述的方法制得的转染试剂和无血清培养基，室温5min；

(2)另取一管，编号为2号管：加入核酸和Opti-MEM培养基；

(3)将1号管溶液按每分钟1ml的速度缓慢加入2号管中，再涡旋混匀；静置，加入无血清培养基中；12-16h换成完全营养培养基；离心，过滤。