[发明专利]一种AAV-DJ型腺相关病毒体外高效感染类器官的用途

权利要求书

1.一种AAV-DJ型腺相关病毒体外高效感染类器官的用途，所述的类器官为人或小鼠的上皮类器官，包括肝脏类器官、肠道类器官和肾类器官；

具体步骤如下：

（1）将刚脱离3D培养的类器官与AAV-DJ病毒感染液混匀，然后平面化共孵育，完成感染过程；

（2）感染完成后，类器官脱离平面化状态，重新回到3D立体培养的状态；

（3）经过3D培养48~72小时后，类器官经过固定，染色，制片，然后用荧光共聚焦显微镜观察拍照GFP荧光；类器官经过洗涤，消化，重悬，用于流式细胞术检测GFP阳性细胞群的比例，即感染效率；

步骤（1）中所述的平面化状态，是指类器官脱离原始的3D培养状态，在与病毒液混合后，均匀的滴在铺有商业化Matrigel的孔板中；

步骤（2）中所述的类器官脱离平面化状态，重新回到3D立体培养的状态，是指类器官连同病毒液一起收集在离心管中，经过自然沉降，去除病毒液，再使用PBS冲洗两遍，去除PBS后，再用Matrigel重新包裹类器官，进行3D培养。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，步骤（1）中所述的AAV-DJ病毒感染液是将商业化的AAV-DJ按照需要感染的类器官细胞数目进行一定的比例稀释，稀释用培养基为类器官培养所用的培养基。

3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，步骤（1）和步骤（2）中所述的类器官培养用的培养基包括基础培养基Advanced DMEM/F12培养基和其他维持类器官正常生长的生长因子或小分子，其组分和含量如下：

100-1000ng/ml 终浓度的R-spondin1；

50-500ng/ml 终浓度的EGF；

100-1000ng/ml 终浓度的 FGF10；

25-250ng/ml 终浓度的 HGF；

10-100nM 终浓度的Gastrin。