[发明专利]一种AAV-DJ型腺相关病毒体外高效感染类器官的用途有效
申请号: | 201810887607.4 | 申请日: | 2018-08-06 |
公开(公告)号: | CN109082402B | 公开(公告)日: | 2021-08-17 |
发明(设计)人: | 赵冰;魏劲松 | 申请(专利权)人: | 复旦大学 |
主分类号: | C12N5/071 | 分类号: | C12N5/071;C12N7/00 |
代理公司: | 上海正旦专利代理有限公司 31200 | 代理人: | 陆飞;陆尤 |
地址: | 200433 *** | 国省代码: | 上海;31 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 aav dj 相关 病毒 体外 高效 感染 器官 用途 | ||
1.一种AAV-DJ型腺相关病毒体外高效感染类器官的用途,所述的类器官为人或小鼠的上皮类器官,包括肝脏类器官、肠道类器官和肾类器官;
具体步骤如下:
(1)将刚脱离3D培养的类器官与AAV-DJ病毒感染液混匀,然后平面化共孵育,完成感染过程;
(2)感染完成后,类器官脱离平面化状态,重新回到3D立体培养的状态;
(3)经过3D培养48~72小时后,类器官经过固定,染色,制片,然后用荧光共聚焦显微镜观察拍照GFP荧光;类器官经过洗涤,消化,重悬,用于流式细胞术检测GFP阳性细胞群的比例,即感染效率;
步骤(1)中所述的平面化状态,是指类器官脱离原始的3D培养状态,在与病毒液混合后,均匀的滴在铺有商业化Matrigel的孔板中;
步骤(2)中所述的类器官脱离平面化状态,重新回到3D立体培养的状态,是指类器官连同病毒液一起收集在离心管中,经过自然沉降,去除病毒液,再使用PBS冲洗两遍,去除PBS后,再用Matrigel重新包裹类器官,进行3D培养。
2.根据权利要求1所述的用途,其特征在于,步骤(1)中所述的AAV-DJ病毒感染液是将商业化的AAV-DJ按照需要感染的类器官细胞数目进行一定的比例稀释,稀释用培养基为类器官培养所用的培养基。
3.根据权利要求1所述的用途,其特征在于,步骤(1)和步骤(2)中所述的类器官培养用的培养基包括基础培养基Advanced DMEM/F12培养基和其他维持类器官正常生长的生长因子或小分子,其组分和含量如下:
100-1000ng/ml 终浓度的R-spondin1;
50-500ng/ml 终浓度的EGF;
100-1000ng/ml 终浓度的 FGF10;
25-250ng/ml 终浓度的 HGF;
10-100nM 终浓度的Gastrin。
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