[发明专利]一种原核生物cDNA5′末端快速扩增方法有效
| 申请号： | 201810888364.6 | 申请日： | 2018-08-07 |
| 公开（公告）号： | CN110819673B | 公开（公告）日： | 2021-07-13 |
| 发明（设计）人： | 刘正飞;刘方;郑可 | 申请（专利权）人： | 华中农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/686 | 分类号： | C12Q1/686 |
| 代理公司： | 武汉宇晨专利事务所(普通合伙) 42001 | 代理人： | 龚莹莹 |
| 地址： | 430070 湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 生物 cdna5 末端 快速 扩增 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种原核生物cDNA5′末端快速扩增方法，包括下述步骤：利用NEB牛痘病毒加帽系统对原核生物的总RNA进行加帽处理，在5′三磷酸RNA的末端加上一个7-甲基鸟苷帽子结构；将加帽的总RNA和GSP1加入到PCR管中并在莫洛尼氏鼠白血病病毒反转录酶的作用下进行反转录，反转录完之后在体系中加入3′末端含有3个单脱氧鸟嘌呤的模板转换引物，与第一链cDNA的胞嘧啶尾退火杂交，反转录以TSO为模板继续进行；最后巢式PCR扩增基因5′末端序列，第一轮PCR引物为与TSO互补的外侧引物和GSP1，第二轮PCR引物为与TSO互补的内侧引物和GSP2。
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