[发明专利]一种来自多能干细胞的神经嵴谱系周细胞及其诱导分化方法

权利要求书

1.一种来自多能干细胞的神经嵴谱系周细胞的诱导分化方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)体外贴壁培养多能干细胞，保持其未分化状态；

(2)当(1)中细胞长到80～90％密合度后，在Accutase作用下消化成单个细胞，用含有5～15μMROCK抑制剂的CDM培养液重悬细胞；

(3)将细胞悬液按1×10⁴～1×10⁵/cm²的密度贴壁培养在培养皿中；

(4)第二天将培养液更换为含CHIR99021和SB431542的NCN2培养液；

(5)贴壁培养8天，以Accutase消化收集细胞；

(6)贴壁培养收集的细胞，并将培养液更换为周细胞诱导液，传代培养2～5次后检测周细胞表型，即得；

其中，步骤(2)所述CDM培养液包括85-100％的DMEM/F12，所述CDM培养液还包括以下组分：N2：0.1-2％、B27：0.1-2％、L-Glu：0.1-5％、β-巯基乙醇：0.01mM-1mM、MEM非必需氨基酸溶液：0.1-5％、BSA：0.01-0.1％、bFGF：2-50ng/ml、EGF：2-50ng/ml、青霉素-链霉素：50-200U/ml；

步骤(4)所述NCN2培养液包括85-100％的DMEM/F12，所述NCN2培养液还包括以下组分：N2：0.1-2％、B27：0.1-2％、SB431542：1μM-100μM、CHIR99021：1μM-100μM、青霉素-链霉素：50-200U/ml；

步骤(6)所述周细胞诱导液为添加了PDGF-BB和bFGF的含血清完全培养液。

2.根据权利要求1所述的来自多能干细胞的神经嵴谱系周细胞的诱导分化方法，其特征在于，步骤(3)所述贴壁培养为：将细胞悬液接种至包被了Matrigel或层粘连蛋白的培养皿中以促进细胞的贴壁。

3.根据权利要求1所述的来自多能干细胞的神经嵴谱系周细胞的诱导分化方法，其特征在于，步骤(5)还包括使用P75与HNK1抗体标记收集的细胞，再通过流式分选P75与HNK1双阳的细胞的步骤。

4.权利要求1～3任一项所述的诱导分化方法诱导分化而得的来自多能干细胞的神经嵴谱系周细胞。