[发明专利]寨卡病毒的qPCR检测方法在审
| 申请号： | 201810890510.9 | 申请日： | 2018-08-07 |
| 公开（公告）号： | CN108950077A | 公开（公告）日： | 2018-12-07 |
| 发明（设计）人： | 陈国强;时长军;李永旺;王凯民;张嵘;姜珊;朱婷;陆春华 | 申请（专利权）人： | 中华人民共和国苏州出入境检验检疫局;苏州西山生物技术有限公司;江苏出入境检验检疫局动植物与食品检测中心 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/6851;C12R1/93 |
| 代理公司： | 苏州创元专利商标事务所有限公司 32103 | 代理人： | 马明渡;杨超 |
| 地址： | 215021 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 寨卡病毒 待测样品 重组质粒 标准品 检测 熔解曲线分析 上游引物序列 下游引物序列 标准曲线 扩增反应 一对引物 荧光信号 靶序列 灵敏性 核酸 引物 采集 病毒 | ||
1.一种寨卡病毒的引物对，其特征在于：其中一条引物ZIKV-F为针对寨卡病毒的NS5基因设计的上游引物，该上游引物的序列为5’- GCCGCCACCAAGATGAACTGAT-3’；另一条引物ZIKV-R为针对寨卡病毒的NS5基因设计的下游引物，该下游引物的序列为5’-GGTCGTTCTCCTCAATCCACACTC-3’ 。
2.一种寨卡病毒的qPCR检测方法，其特征在于：该检测方法包括以下步骤：
第一步，引物和标准品重组质粒的合成：针对寨卡病毒的NS5基因设计了权利要求1所述的一对引物，所述引物在ZIKV/Monkey/Uganda/MR766/1947株的靶序列被人工连接到pUC57载体上，形成标准品重组质粒；
第二步，分别以所述标准品重组质粒和待测样品中的核酸为模板，进行qPCR扩增反应，其中，所述标准品重组质粒的梯度浓度为2.0×108~2.0×10-1 copies/μL，每个梯度浓度重复3次，qPCR扩增反应的20 μL反应体系为：
2×SYBR® Premix Ex Taq™(TliRNaseH Plus） 10 μL；
50×ROX 0.4 μL；
引物ZIKV-F 20 μM，0.2 μL；
引物ZIKV-R 20 μM，0.2 μL；
去离子水 4.2 μL；
核酸模板 5 μL；
qPCR扩增反应后，采集荧光信号，得到qPCR产物的Ct值并进行熔解曲线分析，当Ct值＜36且Tm值在86~87℃之间时，代表生物样品中含有寨卡病毒，为阳性；当Ct值≥36，且Tm值小于86℃或大于87℃时，代表生物样品中不含有寨卡病毒，为阴性；
第三步，通过所述标准品重组质粒的Ct值和各个梯度浓度建立标准曲线，最后，根据标准曲线和待测样品的Ct值得到待测样品的含量。
3.根据权利要求2所述的寨卡病毒的qPCR检测方法，其特征在于：在所述第二步中，qPCR扩增反应条件为：95℃预变性30 s，之后扩增40个循环，每个循环95℃变性5 s，60℃退火延伸31 s，采集信号；循环结束后95℃变性15 s，60℃退火延伸1 min，95℃变性15 s，60℃退火延伸15 s，读值并绘制熔解曲线。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于中华人民共和国苏州出入境检验检疫局;苏州西山生物技术有限公司;江苏出入境检验检疫局动植物与食品检测中心，未经中华人民共和国苏州出入境检验检疫局;苏州西山生物技术有限公司;江苏出入境检验检疫局动植物与食品检测中心许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201810890510.9/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
