[发明专利]一种检测那西肽发酵液中那西肽含量的方法

权利要求书

1.一种检测那西肽发酵液中那西肽含量的方法，其特征在于，包括如下步骤：

a、制备那西肽的对照品溶液；

b、取那西肽发酵液样品，用乙醇水混合溶剂作为浸提液定容后超声提取；制得那西肽的样品溶液；

c、将对照品溶液和样品溶液依次注入HPLC进行测定，记录色谱图和峰面积；用对照品溶液中主成分那西肽A的质量浓度和峰面积计算校正因子，并用所得校正因子计算发酵液样品中那西肽A组分的含量，同时获得那西肽B组分的含量。

2.根据权利要求1所述的一种检测那西肽发酵液中那西肽含量的方法，其特征在于，所述步骤a的具体步骤为称取那西肽对照品后用良性溶剂溶解，再用极性溶剂稀释。

3.根据权利要求2所述的一种检测那西肽发酵液中那西肽含量的方法，其特征在于，所述良性溶剂为二甲基甲酰胺。

4.根据权利要求2所述的一种检测那西肽发酵液中那西肽含量的方法，其特征在于，所述极性溶液为甲醇、乙腈和乙醇中的一种或多种混合。

5.根据权利要求1所述的一种检测那西肽发酵液中那西肽含量的方法，其特征在于，所述乙醇水混合溶剂中乙醇浓度为70％-100％。

6.根据权利要求1所述的一种检测那西肽发酵液中那西肽含量的方法，其特征在于，所述步骤b的步骤为吸取均匀样品于棕色容量瓶中，加浸提液定容，摇匀，超声处理后摇匀，静置，吸取上清液用0.45μm有机滤膜过滤，作为那西肽样品溶液进样测定。

7.根据权利要求1所述的一种检测那西肽发酵液中那西肽含量的方法，其特征在于，所述步骤b的步骤为吸取均匀样品2.5-10.0mL于25mL或50mL棕色容量瓶中，以乙醇浓度为70％-100％的乙醇水混合溶剂作为浸提液进行定容，摇匀，超声处理20-40min后摇匀，静置10min以上，吸取上清液用0.45μm有机滤膜过滤，作为那西肽样品溶液进样测定。

8.根据权利要求1所述的一种检测那西肽发酵液中那西肽含量的方法，其特征在于：所述HPLC测定的色谱条件如下：

色谱柱：C185.0μm 4.6*150mm或250mm；

柱温：25-40℃；

进样量：20-50μL；

流速：0.9-1.1mL/min；

检测波长：235-245nm；

运行时间：15-30min；

流动相：乙腈/磷酸水溶液＝40/60-50/50。

9.根据权利要求8所述的一种检测那西肽发酵液中那西肽含量的方法，其特征在于：所述流动相中磷酸水溶液的浓度为0.01％-0.05％m/V。