[发明专利]一种检测那西肽发酵液中那西肽含量的方法

说明书

本发明公开了一种检测那西肽发酵液中那西肽含量的方法，涉及检测技术领域，涉及那西肽含量的检测方法。本发明包括如下步骤：a、制备那西肽的对照品溶液；b、取那西肽发酵液样品，用乙醇水混合溶剂作为浸提液定容后超声提取；制得那西肽的样品溶液；c、将对照品溶液和样品溶液依次注入HPLC进行测定，记录色谱图和峰面积；用对照品溶液中主成分那西肽A的质量浓度和峰面积计算校正因子，并用所得校正因子计算发酵液样品中那西肽A组分的含量，同时获得那西肽B组分的含量。本发明方法简便快速、准确高效、低毒、低成本，可作为那西肽生产企业的发酵过程监控方法，及时为生产过程控制提供监测数据。

技术领域

本发明涉及检测技术领域，涉及那西肽含量的检测方法，具体的涉及一种检测那西肽发酵液中那西肽含量的方法。

背景技术

那西肽是一种含硫多肽类抗生素，英文名Nosiheptide。那西肽作为一种新型的饲料添加剂不但能促进畜禽生长，提高饲料效率，还具有不易产生耐药性，无残留，对环境影响小，对人畜安全等特点，这些特点完全符合人们对饲料添加剂的要求；而且它不仅能广泛应用于畜禽业还能应用于水产业，具有一定的社会效益和经济效益。因此，那西肽作为一种新型饲料添加剂其应用前景非常广阔。目前，国内外已批准并广泛使用。

那西肽是用微生物培养方法生产的，其中以活跃链霉菌为最好。发酵产物中有一主组分A，同时含有一副组分B。通常所说那西肽为A组分，B组分为受控成分。

那西肽为黄绿色物质，呈粉末状或细针状结晶，可溶于氯仿、吡啶、二甲基甲酰胺、二甲基亚砜，微溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯和苯，不溶于水。

中华人民共和国农业部公告第2382号发布的那西肽预混剂质量标准使用二甲基甲酰胺(DMF)和磷酸盐缓冲溶液对预混剂进行浸提，然后经过滤、稀释等步骤后用微生物检定法进行生物效价检测，稀释液同步用HPLC法测定那西肽组分。该检测方法所用溶剂DMF毒性较大且用量大，粘度较大难过滤，混合试剂配制复杂，操作步骤较多，且微生物检测周期长，不能用于发酵生产的过程质量监控。分光光度法虽然操作简便、快速，但因其专属性差，易受杂质成分干扰而产生误差，所以不能准确地指导生产调控。因此需要开发一种简便、快速又准确的检测方法用于那西肽发酵过程的实时监控。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种检测那西肽发酵液中那西肽含量的简便方法，旨在换掉DMF，改用毒性、粘度和价格都较低的乙醇水混合溶剂，以降低安全隐患，便于过滤操作，同时降低成本。

另一目的是对检测条件和对照品制备过程进行改良和简化，更有利于操作，提高检测准确率和检测效率。

为解决上述技术问题，本发明所采取的技术方案是：一种检测那西肽发酵液中那西肽含量的方法，其特征在于，包括如下步骤：

a、制备那西肽的对照品溶液；

b、取那西肽发酵液样品，用乙醇水混合溶剂作为浸提液定容后超声提取；制得那西肽的样品溶液；

c、将对照品溶液和样品溶液依次注入HPLC进行测定，记录色谱图和峰面积；用对照品溶液中主成分那西肽A的质量浓度和峰面积计算校正因子，并用所得校正因子计算发酵液样品中那西肽A组分的含量，同时获得那西肽B组分的含量。

进一步的技术方案在于，所述步骤a的具体步骤为称取那西肽对照品后用良性溶剂溶解，再用极性溶剂稀释。

进一步的技术方案在于，所述良性溶剂为二甲基甲酰胺。

进一步的技术方案在于，所述极性溶液为甲醇、乙腈和乙醇中的一种或多种混合。

进一步的技术方案在于，所述乙醇水混合溶剂中乙醇浓度为70％-100％。