[发明专利]一种测定茶叶中吡蚜酮残留量的提取净化方法

权利要求书

1.一种测定茶叶中吡蚜酮残留量的提取净化方法，其特征在于包括以下步骤：

1）样品提取

取粉碎茶叶样品1.0 g，加入10 mL甲醇和水的混合提取液，混匀放置15 min后涡旋1min，以6000 r/min离心5 min，取5 mL上清液，35 ℃旋转蒸发至体积不再变化，加入10 mL10 mmol/L的盐酸水溶液溶解残渣，待净化；

2）样品净化

取步骤1）得到的茶叶样品提取物分别加入5 mL甲醇和5 mL水预淋洗PCX固相萃取柱柱，弃去流出液；上样待净化液后，以5 mL 2%甲酸水和5 mL甲醇淋洗固相萃取柱柱，弃去流出液；以1%氨水甲醇淋洗固相萃取柱，收集所有流出液；35 ℃旋转蒸发至近干，氮气吹干，1mL甲醇和水的混合溶液定容，过0.22 μm 有机膜，供LC-MS/MS测试；

3）LC-MS/MS测定

基质匹配标准溶液和样品溶液在以下设定的液相色谱-质谱/质谱条件下进样：

A）液相色谱-质谱/质谱仪器参数：

液相色谱：色谱柱：Waters BEH C18色谱柱；流动相组成：流动相A为0.1%甲酸乙腈，流动相B为水；流速0.25 mL/min；流动相洗脱程序：0-0.5min、5%A，0.5-3.0 min、5%A-30%A，3.0-4.0 min、30%A-70%A，4.0-4.8 min、70%A-99%A,保持1min，5.8-6.5 min、99%A-5%A，保持1min；进样体积5µL；

质谱条件：电离方式ESI⁺,多级反应监测MRM模式测定,毛细管电压3.5 kV，离子源温度150℃，去溶剂化温度350℃，锥孔反吹气流量50 L/h，脱溶剂气流量650 L/h，定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差：相对离子丰度＞50％，允许的相对偏差±20％；相对离子丰度＞20％～ 50％，允许的相对偏差±25％；相对离子丰度＞10％～ 20％，允许的相对偏差±30％；相对离子丰度≤10％，允许的相对偏差±50％；

B）吡蚜酮质谱参数

*定量离子

4）空白试验

除不加样品外，均按上述步骤1）、步骤2）、步骤3）操作进行；

5）结果计算和表述

按以下公式计算样品中吡蚜酮的质量浓度，处理结果须扣除空白值：

式中：

X_i──样品中吡蚜酮的残留量，单位为毫克每千克；

C_i──从标准曲线上得到吡蚜酮的溶液浓度，单位为毫克每升；

V──样液最终定容体积，单位为毫升；

m──最终样液所代表的试样质量，单位为克；

6）判断

以质量浓度X为横坐标，峰面积比值Y为纵坐标，绘制5点标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量测定，样品溶液中待测物的响应值满足仪器检测的线性范围；定量和定性离子对同时存在，且信噪比≥3；样品溶液中待测物出现的色谱峰保留时间与基质匹配标准溶液一致，允许偏差小于±0.5％，则可确定含有该药物。

2.如权利要求1所述的一种测定茶叶中吡蚜酮残留量的提取净化方法，其特征在于所述的步骤1）中甲醇和水的混合提取液中甲醇与水的体积比为8:2。

3.如权利要求1所述的一种测定茶叶中吡蚜酮残留量的提取净化方法，其特征在于所述的步骤2）中以3 mL 1%氨水甲醇淋洗固相萃取柱。

4.如权利要求1所述的一种测定茶叶中吡蚜酮残留量的提取净化方法，其特征在于所述的步骤2）中甲醇和水的混合溶液中甲醇与水的体积比为8:2。