[发明专利]一种测定茶叶中吡蚜酮残留量的提取净化方法

说明书

一种测定茶叶中吡蚜酮残留量的提取净化方法，属于检测技术领域。其包括以下步骤：1）样品提取；2）样品净化；3）LC‑MS/MS测定；4）空白试验；5）结果计算和表述；6）绘制5点标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量测定，样品溶液中待测物的响应值满足仪器检测的线性范围；定量和定性离子对同时存在，且信噪比≥3；样品溶液中待测物出现的色谱峰保留时间与基质匹配标准溶液一致，允许偏差小于±0.5％，则可确定含有该药物。本发明可实现茶叶中吡蚜酮残留量的快速灵敏测定，有机溶剂用量少，为我国食品安全监管和农药管理提供技术支撑。

技术领域

本发明属于检测技术领域，具体涉及一种测定茶叶中吡蚜酮残留量的提取净化方法。

背景技术

茶叶是世界公认的健康饮品，是我国重要经济作物，也是我国传统优势产业。2017年我国茶叶总产量达255万吨，国内茶叶消费量160-170万吨，茶叶出口量35.5万吨。茶叶中的农药残留是影响我国茶叶消费和出口贸易的重要影响因素。吡蚜酮（Pymetrozine，CAS123312-89-0）是一种全新结构的吡啶杂环类杀虫剂，具有高效、低毒、高选择性、对环境安全等特点。目前，吡蚜酮已在我国登记用于防治我国茶园重大害虫茶小绿叶蝉。为保证终端产品茶叶中出吡蚜酮残留量在可接受范围，建立茶叶中吡蚜酮残留量的灵敏检测方法，是食品安全监管和农药管理的需要。

已报道的关于吡蚜酮的残留方法报道主要集中在甘蓝、水稻、棉花、小麦、菠菜、土壤、芹菜、西兰花、菊花等简单基质，通常采用C18、SCX、氨基固相萃取柱净化，液相色谱、液相色谱质谱联用、荧光光谱法等方法检测。以上方法有机溶剂用量较大，环境污染较重，尤其采用C18或氨基固相萃取柱净化时，单个样品的有机溶剂使用量高达200 mL；采用色谱和光谱法测定时易产生假阳性结果；现有的菊花等简单基质的直接乙腈提取联合柱净化方法不能满足茶叶基质中残留测定的回收率要求（CN 105548398 公开的方法）。目前未见复杂基质茶叶中吡蚜酮残留量的快速灵敏检测方法报道，我国也尚未公布茶叶中吡蚜酮残留量测定的标准方法。

吡蚜酮分子结构式如下所示：

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发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明的目的在于设计提供一种测定茶叶中吡蚜酮残留量的提取净化方法的技术方案。该方法通过甲醇和水混合溶剂提取，PCX固相萃取柱柱富集净化后进LC-MS/MS测定，实现了茶叶中吡蚜酮的高灵敏检测。该方法操作简便快速，有机溶剂用量少，在回收率、检出限及精密度等方面均能满足国内外茶叶中残留限量要求，可为茶叶中吡蚜酮残留量的测定提供技术支持。

所述的一种测定茶叶中吡蚜酮残留量的提取净化方法，其特征在于包括以下步骤：

1）样品提取

取粉碎茶叶样品1.0 g，加入10 mL甲醇和水的混合提取液，混匀放置15 min后涡旋1min，以6000 r/min离心5 min，取5 mL上清液，35 ℃旋转蒸发至体积不再变化，加入10 mL10 mmol/L的盐酸水溶液溶解残渣，待净化；

2）样品净化

取步骤1）得到的茶叶样品提取物分别加入5 mL甲醇和5 mL水预淋洗PCX固相萃取柱柱，弃去流出液；上样待净化液后，以5 mL 2%甲酸水和5 mL甲醇淋洗固相萃取柱柱，弃去流出液；以1%氨水甲醇淋洗固相萃取柱，收集所有流出液；35 ℃旋转蒸发至近干，氮气吹干，1mL甲醇和水的混合溶液定容，过0.22 μm 有机膜，供LC-MS/MS测试；

3）LC-MS/MS测定

基质匹配标准溶液和样品溶液在以下设定的液相色谱-质谱/质谱条件下进样：

A）液相色谱-质谱/质谱仪器参数：