[发明专利]一种快速区分PEDV、PDCoV和PReoV的多重RT-PCR检测引物组及试剂盒

说明书

本发明公开一种快速区分PEDV、PDCoV和PReoV的多重RT‑PCR检测引物组及试剂盒，属于动物病毒学和分子生物学技术领域。该试剂盒包括SEQ ID1~6所示的引物序列，还包括PrimeSTAR HR缓冲液、cDNA模板和灭菌水。本发明提供的PEDV、PDCoV和PReoV的多重RT‑PCR检测试剂盒采用多重RT‑PCR扩增，三种病变相似且同为RNA病毒的病毒一次检测，检测总时间控制在2小时左右，其检测方法易于操作、方便快捷，能达到快速检测的目的。

技术领域

本发明属于动物病毒学和分子生物学技术领域，具体为针对PEDV、PDCoV和PReoV的多重RT-PCR的检测引物组、检测试剂盒及应用。

背景技术

猪流行性腹泻（porcine epidemic diarrhea，PED）是由猪流行性腹泻病毒（PEDV）引起的急性、高度接触性肠道疾病，主要以急性水样腹泻、呕吐和迅速脱水死亡为基本特征。各种年龄段的猪都能够感染发病，尤其以1-2周龄内哺乳仔猪为主要发病群体，感染发病率和死亡率甚至可高达 100%。英国和比利时在20世纪70年代，各自率先报道了该病的发生，随后该病在全球多个主要养猪国家相继暴发和流行。2013年4月，美国出现PED疫情并很快蔓延至整个国家，截止2014年底，至少造成800万头新生仔猪死亡，经济损失高达18亿美元。随后不久，加拿大、墨西哥、多米尼克等与美国相邻的北美国家和欧洲的德国等地也暴发了PED疫情。中国自 2010 年十月份也暴发了PED疫情，造成超过百万头哺乳仔猪的死亡，损失极其惨重。

猪德尔塔冠状病毒（porcine deltacoronavirus，PDCoV）又称猪丁型冠状病毒，是一种新发现的冠状病毒，属于冠状病毒科（Coronaviridae）、δ冠状病毒属（Deltacoronavirus）的成员。引起以呕吐、脱水、严重腹泻、仔猪致死率高为主要临床特征的肠道疾病，给养猪业带来严重损失。2012年，在中国香港首次报道。2014 年初美国俄亥俄州首次检测报道出一种新的猪肠道冠状病毒PDCoV，截止2014年底美国 17 个州均有发现PDCoV 的感染。随后，加拿大、韩国、越南、老挝等国家也报道从腹泻猪的临床样品中检测到PDCoV，其阳性检出率高达25%，个别地区检出率还高达35%。基因序列分析表明，美国 PDCoV分离株序列与我国香港和韩国发现的毒株具有高度相似性，同源性均高于 98.9％，这表明PDCoV 已在国际生猪贸易过程中广泛传播。2014年，中国大陆地区首次报道检出该病毒。在随后的报道中，中国江苏、河北、安徽、广西等地区病料检测结果显示PDCoV已在我国至少存在了11年。而且PDCoV还常与其它腹泻病原混合感染，使得临床诊断和检测非常困难，给猪腹泻疾病的防控带来了极大的困难。

20世纪50年代呼肠孤病毒的首次发现，证实了dsRNA病毒可以作为稳定的生命形式存在于自然界中。呼肠孤病毒(Reovirus)系呼肠孤病毒科(Reoviridea)正呼肠孤病毒属(Orthoreovirus)成员主要感染人和哺乳动物，如猪、牛、犬、猫、鼠等以及禽的呼吸道或消化道，对动物具有广泛的致病性。