[发明专利]一种肿瘤干细胞的分离检测方法

说明书

本发明公开了一种肿瘤干细胞的分离检测方法，具体包括以下步骤：S1、样本的制备：首先将取样的肿瘤细胞加入试管中，然后向试管中加入一号消化酶液，可将取样的肿瘤细胞消化至单个细胞，然后对样本进行离心和沉淀，再对沉淀的细胞进行收集，即可得到样本细胞，S2、消化酶状态模拟：将S1中收集的样本细胞中加入二号消化酶液，并在20～36℃孵育1～10h，涉及肿瘤干细胞分离检测技术领域。该肿瘤干细胞的分离检测方法，可实现更加直观的观察肿瘤干细胞分离和检测情况，很好的实现了通过对肿瘤干细胞内的DNA物质进行荧光染色来方便工作人员进行更加直观的贯穿肿瘤干细胞，达到了缩短工作人员分离和检测肿瘤干细胞时间的目的。

技术领域

本发明涉及肿瘤干细胞分离检测技术领域，具体为一种肿瘤干细胞的分离检测方法。

背景技术

肿瘤干细胞是指肿瘤中具有自我更新能力并能产生异质性肿瘤细胞的细胞，传统观念认为，肿瘤是由体细胞突变而成，每个肿瘤细胞都可以无限制地生长，但这无法解释肿瘤细胞似乎具有无限的生命力以及并非所有肿瘤细胞都能无限制生长的现象，肿瘤细胞生长、转移和复发的特点与干细胞的基本特性十分相似，因此，有学者提出肿瘤干细胞的理论，这一理论为我们重新认识肿瘤的起源和本质，以及临床肿瘤治疗提供了新的方向和视觉角度，近年来大量报道发现肿瘤中有极少数的一群细胞，其恶性程度极高，当病人放化疗后大的肿瘤块随即消失，然而这些极少量的细胞仍然能够存活，PET-CT也不能够检测其存在，而正是这些恶性细胞复发以后，便更加凶猛，大量转移吞噬生命，这些细胞就是肿瘤干细胞，当今许多主流的观点认为放化疗富集的肿瘤干细胞是导致传统治疗方法失败的主要原因，2006年美国癌症研究协会给出TSC的定义是：肿瘤中具有自我更新能力并能分化产生异质性肿瘤细胞的细胞，它的自我更新能力以及分化能力完全满足干细胞特有的两个主要特征，而这两个特征正是造成肿瘤复发和肿瘤转移的必要原因。

目前的肿瘤干细胞分离和检测过程中，大多是直接通过显微镜对组织细胞进行分离和检测，然而，这样通过简单目测的方式不能更加直观的观察肿瘤干细胞分离和检测情况，不能实现通过对肿瘤干细胞内的DNA物质进行荧光染色来方便工作人员进行更加直观的贯穿肿瘤干细胞，无法达到缩短工作人员分离和检测肿瘤干细胞时间的目的，从而给工作人员的肿瘤干细胞分离和检测工作带来了极大的不便。

发明内容

(一)解决的技术问题

针对现有技术的不足，本发明提供了一种肿瘤干细胞的分离检测方法，解决了不能更加直观的观察肿瘤干细胞分离和检测情况，不能实现通过对肿瘤干细胞内的DNA物质进行荧光染色来方便工作人员进行更加直观的贯穿肿瘤干细胞，无法达到缩短工作人员分离和检测肿瘤干细胞时间目的的问题。

(二)技术方案

为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：一种肿瘤干细胞的分离检测方法，具体包括以下步骤：

S1、样本的制备：首先将取样的肿瘤细胞加入试管中，然后向试管中加入一号消化酶液，可将取样的肿瘤细胞消化至单个细胞，然后对样本进行离心和沉淀，再对沉淀的细胞进行收集，即可得到样本细胞；

S2、消化酶状态模拟：将S1中收集的样本细胞中加入二号消化酶液，并在20～36℃孵育1～10h，从而实现模拟消化酶的应激状态，之后将孵育后的细胞移至1～18℃条件下继续孵育10～72h，即可实现模拟低温和消化酶应激状态；

S3、无血清和低氧状态模拟：将S2中孵育后的细胞分别经洗涤、离心和沉淀后，得到的细胞加入不含血清或血清低于6％的细胞培养液，均匀混合，在密闭条件下，在20～36℃下孵育25～65h，即可实现模拟无血清和低氧应激状态；

S4、肿瘤细胞的分离：将S3中孵育后的细胞离心和沉淀收集的细胞，加入含5～15％FBS的细胞培养液，均匀混合，之后将细胞接种到细胞培养皿中进行贴壁生长，细胞贴壁后换肿瘤干细胞TSC培养基进行培养，当细胞长满后，重复S1-S4步骤即可得到肿瘤细胞；