[发明专利]核苷酸类似物以及筛选DNA聚合酶的方法

权利要求书

1.一种核苷酸类似物，其特征在于，具有下列结构，

其中，

L表示可切除连接基团；

Label表示第一可检测标记；

P表示三磷酸基团；

Base表示腺嘌呤、鸟嘌呤、胞嘧啶或胸腺嘧啶；

优选地，所述可切除连接基团L具有下列结构，

任选地，所述第一可检测标记为生物素标记或荧光标记。

2.一种筛选DNA聚合酶的方法，其特征在于，包括：

使含有核酸分子、核苷酸类似物和候选DNA聚合酶的反应混合物置于适于发生DNA聚合反应的第一条件下；

对所述反应混合物中的第一可检测标记进行检测；以及

基于所述检测结果，确定目标DNA聚合酶，

其中，

所述核酸分子具有双链区和5’-单链区，所述5’-单链区具有双链区毗邻核苷酸；

所述核苷酸类似物为权利要求1所述的核苷酸类似物，并且所述核苷酸类似物的碱基与所述双链区毗邻核苷酸的碱基匹配。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述核酸分子为线型，所述核酸分子的两端分别具有一个5’-单链区；

任选地，两个5’-单链区具有相同的所述双链区毗邻核苷酸；

任选地，所述5’-单链区携带第二可检测标记。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述核酸分子为线型，所述核酸分子有且仅有一端具有一个5’-单链区；

任选地，所述5’-单链区和/或非5’-单链区所在核酸链的5端’携带第二可检测标记。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述核酸分子为环型，所述核酸分子具有一个5’-单链区；

任选地，非5’-单链区所在核酸链的5端’携带第二可检测标记。

6.根据权利要求3～5任一项所述的方法，其特征在于，所述第一可检测标记的检测体系和所述第二可检测标记被设置为适于发生共振能连转移；

任选地，所述第二可检测标记和第一可检测标记的检测体系的间隔为不大于30nt；

优选地，所述第二可检测标记和第一可检测标记的检测体系的间隔为15～30nt。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述第一可检测标记为生物素，所述第一可检测标记的检测体系包括携带第一荧光标记的链霉亲和素，所述第二可检测标记为第二荧光标记，所述第一荧光标记与所述第二荧光标记之间适于发生共振能连转移；

任选地，所述第一荧光标记为cy5和cy3之一，所述第二荧光标记为cy5和cy3的另一个；

优选地，所述第一荧光标记为cy3，所述第二荧光标记为cy5。

8.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述核酸分子是通过如下方式获得的：

将5’端携带有cy5的单链核酸进行退火反应，所述退火反应是在85℃的条件下进行10min；

任选地，所述单链核酸具有SEQ ID NO:1～2所示的核苷酸序列；

优选地，所述具有SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示核苷酸序列的单链核酸的摩尔比为1:1。