[发明专利]一种基于TiO2

权利要求书

1.一种基于TiO₂介晶诱导的共振能量转移型电致化学发光及其对卵巢癌标记物的免疫传感方法，其特在于，包括以下步骤：

（1） 玻碳电极GCE首先在铺有氧化铝粉末的麂皮上机械打磨抛光，用二次水洗去表面残留粉末，再移入超声水浴中清洗，直至清洗干净，最后依序用乙醇，稀酸和水彻底洗涤；

（2）取50 μL 浓度为1.0×10^-2 M的钌联吡啶Ru(bpy)₃²⁺溶液与50 μL浓度为5 mg/mL锐钛矿TiO₂介晶CAMs溶液混合，室温震荡2 h，经洗涤、离心、再分散制得Ru(bpy)₃²⁺@CAMs复合物溶液；在5 wt.%戊二醛的辅助作用下加入50 μL 浓度为100 ng/mL抗体Ab，在37 ºC下震荡40 min，后经洗涤、离心、再分散，最终制得Ab-Ru(bpy)₃²⁺@CAMs复合物；滴加3 μL上述所得Ab-Ru(bpy)₃²⁺@CAMs复合物悬浮液于干净的玻碳电极表面，红外灯下烘干，冷却至室温，制得Ab-Ru(bpy)₃²⁺@CAMs修饰的玻碳电极；

（3）将步骤（2）制备的修饰电极置于浓度为1.0 wt.%的BSA溶液中孵育30 min，以封闭电极表面上非特异性活性位点，用去离子水冲洗电极表面洗去物理吸附，并保存在4°C冰箱中备用；

（4）取20 μL浓度比为4:1的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐EDC及N-羟基琥珀酰亚胺NHS混合液加入到50 μL 浓度为0.6 mg/mL核/壳状量子点CdZnSe/ZnSe QDs溶液中，室温震荡1 h，以达到活化羧基的目的；然后将50 mL Envision复合物加入到上述溶液中，在室温下混合震荡2 h，经洗涤、离心、再分散制得Envision-CdZnSe/ZnSe QDs复合物溶液；随后，在5 wt.%戊二醛的辅助作用下加入50 μL浓度为10 ng/mL脂多糖刺激脂蛋白受体LSR，在37 ºC下震荡30 min，经离心、洗涤、再分散制得Envision-CdZnSe/ZnSe QDs/LSR复合物溶液，然后在上述溶液中加入1.0 wt.% BSA封闭非特异性吸附位点，储存在4°C冰箱中备用；

（5）将步骤（4）制得的Envision-CdZnSe/ZnSe QDs/LSR复合物溶液与不同浓度的脂多糖刺激脂蛋白受体LSR标准溶液等体积混合后，取3 μL上述混合液于步骤（2）制备的修饰电极界面，并在37 ºC下孵育40 min，用去离子水冲洗电极表面，制得Envision-CdZnSe/ZnSeQDs/LSR/Ab-Ru(bpy)₃²⁺@CAMs修饰玻碳电极, 并保存在4 °C冰箱中备用。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的锐钛矿TiO₂介晶CAMs由下述方法制备的：9 g 对苯二甲酸，18 mL 无水甲醇，162 mL 无水N, N-二甲基甲酰胺以及5 ml 钛酸四丁酯混合后转移至200 mL反应釜中，在150 °C 下加热48 h，待反应物冷却后用甲醇离心、洗涤数次，最后，将所得产物在400 °C 下煅烧5 h，自然冷却即可。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的核/壳状量子点CdZnSe/ZnSe QDs由下述方法制备的：将1.5 mM氧化镉溶液, 15 mM醋酸锌溶液，9 mL十八烯酸和20 mL十八烯依次加入100 mL三颈圆底烧瓶中，在100 °C真空条件下加热30 min；随后，混合液在氮气保护作用下加热到290 °C，取3 mM硒Se溶解于1.5 mL三丁基膦TBP与1.5 mL十八烯混合溶液中，形成硒-三丁基膦Se-TBP溶液，然后快速加入圆底烧瓶中，经8分钟反应之后，形成CdZnSe核；之后，当温度升高到300 °C时，取3 mM上述硒-三丁基膦Se-TBP溶液缓慢加入到圆底烧瓶中以形成ZnSe壳；待反应达到平衡，取出反应物分散于体积比为1:3的正己烷/丙酮混合溶液中，经离心、洗涤三次，得到最终产物核/壳状量子点CdZnSe/ZnSe QDs，重新分散于三氯甲烷中备用。