[发明专利]液相色谱测定苯并噁嗪利福霉素的方法

说明书

本发明涉及一种利用液相色谱对利福平合成中间体苯并噁嗪利福霉素定量分析的方法，属于化学分析领域。所述方法包括：一、用缓冲液配制苯并噁嗪利福霉素标准物质的标准溶液；二、对苯并噁嗪利福霉素粗产物进行处理：将粗产物加入到醋酸溶液中，抽滤，获得固体产物苯并噁嗪利福霉素，再加入乙腈溶解，用缓冲液定容，然后用微孔滤膜过滤除杂，得到液相色谱检测样品；三、对所述标准溶液进行液相色谱分析，绘制标准曲线；四、将样品用液相色谱分析，对比标准曲线测定利福平合成中间体苯并噁嗪利福霉素。所述方法可准确测定利福平合成中间体苯并噁嗪利福霉素的含量，填补了现有技术的缺陷。

技术领域

本发明涉及一种利用液相色谱对利福平合成过程中产生的中间体定量分析的方法，具体涉及一种采用液相色谱测定利福平合成过程中环合反应后的中间体苯并噁嗪利福霉素的方法，属于化学分析领域。

背景技术

利福平(Rifampin)是一种所属于利福霉素类的半合成广谱抗生素，对结核菌有强大抑制和杀灭作用，对革兰氏阴性细菌、麻风杆菌、沙眼衣原体及某些革兰氏阳性细菌亦有效。

在公开的专利中利福平的合成通常包括两步反应，即环合和缩合反应。中国发明专利申请公开说明书101486716A中公开优质利福平的制备方法，利福霉素S钠盐经醋酸酸化得到游离的利福霉素S，随后同二羟甲基叔丁胺反应生成苯并噁嗪利福霉素，然后再更换溶剂，同1-甲基-4-氨基哌嗪反应，生成利福平。以利福霉素S为原料，与二羟甲基叔丁胺反应生成苯并噁嗪利福霉素的反应方程式如下：

目前，第一步反应主要由薄层色谱进行监控，虽然可以快速检测反应物是否反应完全，但其在定量方面的精密度偏差，不能得到确切的反应数据，因此不能很好地服务于生产工艺的改进。针对利福平合成中间体苯并噁嗪利福霉素建立一种切实可行的分析方案，分析中间体含量、反应收率变化，可为更好地优化利福平合成工艺提供指导。

发明内容

针对现有技术存在的缺陷，本发明的目的在于提供一种液相色谱测定利福平合成中间体的方法，所述利福平是以利福霉素S为原料，经环合和缩合反应生成的，所述环合反应中会生成中间体苯并噁嗪利福霉素。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

提供一种利用液相色谱对利福平合成过程中产生的中间体定量分析的方法，其中，所述利福平是以利福霉素S为原料，经环合和缩合反应生成的，所述合成中间体为环合反应后生成的苯并噁嗪利福霉素；所述方法步骤如下：

步骤一、配制标准溶液

称取苯并噁嗪利福霉素标准物质，用乙腈溶解，然后用体积比为1:1的乙腈和0.075mol/L磷酸二氢钾溶液的混合溶液定容，用孔径为0.45μm微孔滤膜进行过滤，收集滤液得到标准溶液；

步骤二、对环合反应液进行处理，所述的环合反应液为环合反应后反应器出口的溶液；

将环合反应后含苯并噁嗪利福霉素的反应器出口物料滴加到质量分数为0.45％～0.9％的醋酸溶液中，同时不断搅拌以分散固体粗产品，然后在-0.04MPa～-0.1MPa下减压抽滤，得到固体苯并噁嗪利福霉素，经烘干后，取适量固体，用乙腈溶解，再用体积比为1:1的乙腈和0.075mol/L磷酸二氢钾溶液的混合溶液定容，用孔径为0.45μm的滤膜进行微孔滤膜过滤，收集滤液用作液相色谱检测样品；

步骤三、绘制标准曲线

采用外标法对步骤一制得的标准溶液进行液相色谱分析，色谱分析条件如下所示：

色谱柱：Kromasil 100 C8,5μm,150mm×4.6mm

柱温：25℃

柱压：97.60bar

泵模式：等度