[发明专利]抗坏血酸电致化学发光测定方法

说明书

本发明公开一种抗坏血酸电致化学发光测定方法。本发明所述金纳米团簇探针的抗坏血酸电致化学发光测定方法是采用还原法制备高量子产率金纳米团簇电致化学发光探针，以二氧化锰纳米材料作为电致化学发光猝灭剂，利用抗坏血酸与二氧化锰的氧化还原反应恢复电致化学发光信号，实现对抗坏血酸含量的测定。在1.0×10^‑9~1.0×10^‑2 mol/L的浓度范围内抗坏血酸浓度的对数值与相对电致化学发光强度变化值呈线性关系，检测限为2.56×10^‑10 mol/L。并且，本发明操作简单、灵敏度高、重现性和选择性好，因而具有较好的应用前景。

技术领域

本发明涉及一种金纳米团簇探针的抗坏血酸电致化学发光测定方法，属于分析化学及纳米技术领域。

背景技术

抗坏血酸（ascorbic acid），又名维生素 C，广泛存在于食品和植物组织中，是一种重要的抗氧化剂，也是维护机体正常生理功能的重要维生素之一。抗坏血酸广泛参与体内一系列代谢及氧化还原反应，并且有助于合成胶元和黏多糖等细胞间质，在肾上腺皮质激素的合成、体内氧化还原中也不可缺少。人体抗坏血酸的缺乏会导致坏血病，因此对抗坏血酸灵敏及选择性地检测在医药和食品领域均具有重要意义。

测定抗坏血酸的常用方法有酶分析法、分光光度法、色谱分析法、化学发光法及荧光分析法等。大多要求较高的实验条件和操作技术，有些方法步骤烦琐，不利于快速分析。加之一些借助颜色进行分析的方法也会由于待测样品本身带有颜色而影响测定的结果。电致化学发光分析法是将化学发光与电化学相结合而发展起来的一种新的分析方法，具有背景信号低、选择性好、灵敏度高、线性范围宽和检出限低等特点，已被广泛应用于临床诊断、药物、免疫、食品质量及其它物质的测定。近年来，基于量子点或纳米团簇的电致化学发光分析法，因具有背景信号低、灵敏度高、可控性好、试剂可以循环使用和分析测试范围广等优点，已在生物、医药，和环境等领域得到了广泛的应用。金纳米团簇作为新型纳米发光体，具有无毒、水溶性好、比表面积大、制备条件温和、表面易修饰，且具有特殊光电性质等特点，己在生物医药、临床分析、传感检测和催化等领域广泛应用。

本发明以金纳米团簇为电致化学发光探针，以二氧化锰纳米片为猝灭剂，基于抗坏血酸和二氧化锰之间的氧化还原反应建立了一种高灵敏、高选择、快速的抗坏血酸测定新方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种以金纳米团簇为电致化学发光探针的抗坏血酸测定方法。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：一种基于金纳米团簇探针的抗坏血酸电致化学发光测定方法，其特征是：首先在电极表面修饰金纳米团簇，通过还原法制备高量子产率金纳米团簇电致化学发光探针，并进一步在电极表面修饰二氧化锰纳米材料，将其作为电致化学发光猝灭剂，进而将修饰电极浸入含有抗坏血酸的样品中，抗坏血酸与二氧化锰发生氧化还原反应，采集修饰电极的电致化学发光信号，根据电致化学发光信号的改变实现抗坏血酸的测定。

所述还原法制备高量子产率金纳米团簇电致化学发光探针采用下述的电化学还原法或化学还原法制备：

（1）电化学还原法：采用三电极体系，以金纳米团簇修饰玻碳电极为工作电极，铂丝电极为对电极，Ag/AgCl为参比电极，将上述电极插入0.1 mol/L pH 7.4磷酸盐缓冲溶液中，施加-1.4 V~-2 V范围内负电位电压，进行恒电位还原处理5 min~1 h，得到电化学发光金纳米团簇探针；

（2）化学还原法：将金纳米团簇修饰玻碳电极浸泡在0.1~1 mol/L硼氢化钠溶液反应5min~30 min，得到化学还原法制备的金纳米团簇探针修饰电极。

所述金纳米团簇为功能化修饰金纳米团簇，采用N-乙酰化-L-半胱氨酸-金纳米团簇或牛血清白蛋白-金纳米团簇。