[发明专利]一种低温高效使用循环酶法的二氧化碳试剂盒

权利要求书

1.一种低温高效使用循环酶法的二氧化碳试剂盒，其特征在于，所述试剂盒由NADH类似物循环再生系统和二氧化碳测定试剂组成：NADH类似物循环再生系统由6-磷酸-果糖脱氢酶、己糖激酶、果糖、腺嘌呤核苷三磷酸二钠盐组成；二氧化碳测定试剂由pH＝8的Tris-盐酸、稳定剂、草酰乙酸、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶、磷酸烯醇式丙酮酸钾、低温苹果酸脱氢酶、Triton-100组成；其中，6-磷酸-果糖脱氢酶来源于海洋低温产甘油假丝酵母(Candidaglycerol)、己糖激酶来源于海洋低温短乳杆菌(Lactobacillus brevis)、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶来源于海洋低温谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)，低温苹果酸脱氢酶来源于胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)和粘性沙雷氏菌(Serratiamarcescens)；所述NADH类似物循环再生系统由6-磷酸-果糖脱氢酶5-20U/L、己糖激酶50-200U/L、果糖1-2g/L、腺嘌呤核苷三磷酸二钠盐0.5-1/L组成，二氧化碳测定试剂由pH＝8的Tris-盐酸0.1mol/L、稳定剂1g/L、草酰乙酸3g/L、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶0.1g/L、磷酸烯醇式丙酮酸钾0.6g/L、低温苹果酸脱氢酶0.05g/L、Triton-100 1g/L组成；所述稳定剂为三梨醇、甘露醇、丙三醇中的至少一种。

2.如权利要求1所述的一种低温高效使用循环酶法的二氧化碳试剂盒，其特征在于，NADH类似物循环再生系统由6-磷酸-果糖糖脱氢酶10U/L、己糖激酶100U/L、果糖1g/L、腺嘌呤核苷三磷酸二钠盐0.5g/L组成，二氧化碳测定试剂由pH＝8的Tris-盐酸0.1mol/L、稳定剂1g/L、草酰乙酸3g/L、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶0.1g/L、磷酸烯醇式丙酮酸钾0.6g/L、苹果酸脱氢酶0.05g/L、Triton-100 1g/L组成。

3.如权利要求1所述的一种低温高效使用循环酶法的二氧化碳试剂盒，其特征在于，低温苹果酸脱氢酶具体筛选方法为：从深海海泥、海水中采集样本，通过含0.1-0.2g/L溴甲酚绿的牛肉膏蛋白胨固体培养基进行初筛，筛选出产酸性较强的菌株，利用含MTT0.015 g/L的牛肉膏蛋白胨固体培养基来检测菌株的动力性，进行第二次筛选，选择动力性较强的菌株测酶活，通过双重筛选准确的筛选出高产MDHs的低温菌株。