[发明专利]检测EGFR基因19外显子突变的试剂盒及方法在审
| 申请号： | 201810895873.1 | 申请日： | 2018-08-08 |
| 公开（公告）号： | CN109082468A | 公开（公告）日： | 2018-12-25 |
| 发明（设计）人： | 蒋析文;朱小亚;刘悦;颜尔聪 | 申请（专利权）人： | 中山大学达安基因股份有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6886 | 分类号： | C12Q1/6886;C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 上海助之鑫知识产权代理有限公司 31328 | 代理人： | 陈详 |
| 地址： | 510665 广东省*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 外显子突变 试剂盒 患者血液 突变类型 游离核酸 灵敏度 种检测 检测 探针 引物 样本 | ||
1.一种用于数字PCR检测EGFR基因19外显子突变的检测引物对，其特征在于，所述检测引物对包括检测上游引物和检测下游引物；其中，所述检测上游引物的核苷酸序列如SEQID NO.:1所示，所述检测下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.:2所示。
2.一种用于数字PCR检测EGFR基因19外显子突变的探针，其特征在于，所述探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.:4所示。
3.如权利要求2所述的探针，其特征在于，所述探针的5’端包含有荧光报告基团FAM；和/或，所述探针的3’端包含有荧光淬灭基团MGB。
4.一种用于数字PCR检测EGFR基因19外显子突变的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的引物对。
5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括权利要求2所述的探针。
6.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括PCR扩增阻断剂，所述PCR扩增阻断剂与EGFR基因19外显子19del位点的野生型序列结合，特异性阻断所述检测引物对对目的片段的扩增；优选地，所述PCR扩增阻断剂的3’端标记有ZIP；更优选地，所述PCR扩增阻断剂的核苷酸序列如SEQ ID NO.:3所示。
7.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括内控上游引物和内控下游引物，其中，所述内控上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.:5所示，所述内控下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.:6所示；和/或
所述试剂盒还包括内控探针，所述内控探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.:7所示；优选地，所述内控探针的5’端标记有VIC荧光报告基团，和/或，所述内控探针的3’端标记有MGB荧光淬灭基团。
8.一种数字PCR检测EGFR基因19外显子突变的方法，其特征在于，所述方法包括步骤：
(1)提供待检测对象的DNA样本；
(2)制备数字PCR反应体系并进行数字PCR检测：
其中，所述数字PCR反应体系包括步骤(1)提供的所述DNA样本、权利要求1所述的检测引物对、和权利要求2所述的探针。
9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述DNA样本来自血液游离核酸。
10.本发明第一方面所述的检测引物对、和/或本发明第二方面所述的探针的用途，用于制备数字PCR检测试剂盒，所述数字PCR检测试剂盒用于检测EGFR基因19外显子突变。
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