[发明专利]一种CsTTG1基因与茶叶茸毛生长发育线性关系的鉴定方法

说明书

本发明提供一种CsTTG1基因与茶叶茸毛生长发育线性关系的鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：S1.选取待测茶树品系，取茶树品系茶叶的顶芽、第二叶、第三叶、老叶；S2.分别提取茶叶的顶芽、第二叶、第三叶、老叶的RNA序列；S3.将提取的RNA序列分别反转录成cDNA；S4.以cDNA为模板，通过特异性引物对进行PCR扩增；S5.对PCR扩增的产物进行测序，检测分析CsTTG1在茶叶茸毛生长发育线性关系中是否具有特异性表达。本发明可为深化对茸毛形成分子机理的认识，同时也为指导茶树的遗传育种提供重要的理论依据。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种CsTTG1基因与茶叶茸毛生长发育线性关系的鉴定方法。

背景技术

茶树的嫩叶是制茶的主要原料，特别是早春时期采摘的茶叶品质极佳，茶树嫩芽茸毛中含有更高的氨基酸和较少的多酚类物质，赋予茶汤更多鲜味和更少涩味。茶叶茸毛的数量和质量是评定茶树品种经济性的主要性状之一，茶树芽叶的茸毛越多，表明茶树芽叶越嫩，同时其质量也越好。

茶叶中的茸毛可以提高茶叶外形品质。许多名茶包括红茶、白茶等在制作过程中，都要求茶毫能显露出来，以便提高干茶外形品质和茶汤口感品质，如高级祁红、滇红、黄山毛峰、白毫银针、信阳毛尖等。高品味的名优茶中富含茸毛，茸毛能增加茶叶的鲜甜并减少苦涩，而茶叶的鲜甜主要来源于游离的氨基酸如天冬氨酸和丝氨酸。茶叶茸毛很大程度上积极影响口感品质的形成，在加工过程中，由于杀青及揉捻的外力作用，鲜叶中的部分茸毛会发生脱落，沾附在茶叶表面。冲泡之后，附在茶叶中的茶毫会完全溶在茶汤中，其中的氨基酸和其它成分会融进茶汤中，增加了茶汤的香气和滋味，提高了茶汤的口感品质。

现有研究采用SMART-RACE技术克隆了茶树Dof（DNAbindingwithonefinger）基因CsCDF1的全长cDNA序列，并利用在线生物信息学软件对其进行了分析。采用实时荧光定量PCR分析该Dof基因在茶树不同组织间的表达差异和昼夜表达规律，及其在氮饥饿处理2周后对不同浓度氮素诱导的响应。该cDNA序列全长1606bp，包含1个编码464个氨基酸的完整开放阅读框，含有高度保守的DOF结构域，推导的蛋白分子量为50.8kDa，理论等电点（PI）为5.52；其编码的蛋白序列与茸毛烟草、马铃薯和美花烟草的CDF蛋白（Cyclingdoffactor）相似性分别为69%、67%、68%。系统发育分析结果表明，该基因编码的氨基酸序列与拟南芥CDF蛋白聚为一类，因此将其命名为CsCDF1；CsCDF1在3个不同茶树品种根系中的表达量均高于一芽二叶和成熟叶；在一天中，该基因的表达呈现出昼夜节律变化；在氮饥饿后重新供氮，不同组织中该基因对不同浓度氮素的响应均为上调。已有研究发现，发现茶树中和调控拟南芥表皮毛生长发育相关的同源基因AtTTG1表达模式相关，并命名为CsTTG1。

但是关于影响茶叶茸毛生产发育的基因以及其与茶叶茸毛生长发育线性关系尚未有研究。因此，鉴定CsTTG1基因与茶叶茸毛生长发育线性关系，可以为CsTTG1基因的表达模式与茸毛发育的关系，通过对不同品种间茸毛密度分布特征的研究，划分品种茸毛等级；研究CsTTG1在品种间的表达差异，分析CsTTG1基因表达模式与茸毛分布特征的关系；并以模式植物的遗传转化来验证CsTTG1基因功能。不仅深化对茸毛形成分子机理的认识，同时也为指导茶树的遗传育种提供重要的理论依据。

发明内容

有鉴于此，本发明提供一种CsTTG1基因与茶叶茸毛生长发育线性关系的鉴定方法。本发明可为深化对茸毛形成分子机理的认识，同时也为指导茶树的遗传育种提供重要的理论依据。

本发明的技术方案为：一种CsTTG1基因与茶叶茸毛生长发育线性关系的鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：