[发明专利]汞中毒的检测及其试剂盒在审
| 申请号： | 201810896151.8 | 申请日： | 2018-08-07 |
| 公开（公告）号： | CN109207578A | 公开（公告）日： | 2019-01-15 |
| 发明（设计）人： | 朱宝立;丁恩民;张锋;张恒东;沈欢喜 | 申请（专利权）人： | 江苏省疾病预防控制中心;昆山市疾病预防控制中心（昆山市卫生检测中心） |
| 主分类号： | C12Q1/6883 | 分类号： | C12Q1/6883;C12Q1/6851 |
| 代理公司： | 上海汉声知识产权代理有限公司 31236 | 代理人： | 胡晶 |
| 地址： | 210009 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 试剂盒 检测 分子标志物 生物基因检测 相对定量 早期诊断 职业健康 数据处理 标志物 表达量 不可逆 应用 监护 损伤 发现 成功 | ||
1.MicroRNA hsa-miR-92a和hsa-miR-486在汞中毒检测上的应用。
2.一种检测汞中毒的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)获得个体的外周血，分离出上层血浆；
(2)提取血浆中的总RNA，同时加入线虫microRNA cel-miR-238作为参照，并对hsa-miR-92a和hsa-miR-486和cel-miR-238反转录为cDNA，引物如下所示；
(3)反转录后，使用特异性的扩增引物和探针进行荧光定量PCR实验；
(4)利用RQManager1.2.1软件对结果进行分析，根据结果设定每个指标的阈限值后，得到每个样本的每个指标的Ct值，采用相对定量方法对定量结果进行分析和比较，miRNA的表达量用ΔCt表示，其中ΔCt＝Ct cel-miR-238-Ct miRNA，代入公式计算所得P值若小于诊断分界值0.707则判为阳性，即诊断为汞中毒，反之为阴性。
3.根据权利要求2所述的检测汞中毒的方法，其特征在于，步骤(2)的血浆总RNA样品为EDTA抗凝外周血离心后上层血浆的总RNA样品。
4.根据权利要求2所述的检测汞中毒的方法，其特征在于，步骤(2)的反转录体系为：
5.根据权利要求2所述的检测汞中毒的方法，其特征在于，步骤(2)的反转录条件为：
6.根据权利要求2所述的检测汞中毒的方法，其特征在于，步骤(3)的PCR扩增体系为：
7.根据权利要求2所述的检测汞中毒的方法，其特征在于，步骤(3)的PCR扩增条件为：
8.根据权利要求2所述的检测汞中毒的方法，其特征在于，步骤(3)的hsa-miR-92、hsa-miR-486和cel-miR-238PCR扩增引物和探针序列如下：
9.一种用于检测汞中毒的试剂盒，其特征在于，包括线虫microRNA cel-miR-238，如下所示的反转录引物序列，
和如下所示的扩增引物和探针序列。
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