[发明专利]基于荧光定量PCR的茶树基因CsTTG1表达特征分析方法在审
| 申请号： | 201810896179.1 | 申请日： | 2018-08-08 |
| 公开（公告）号： | CN108950048A | 公开（公告）日： | 2018-12-07 |
| 发明（设计）人： | 孙彬妹;代风玲;刘任坚;刘少群;肖熙 | 申请（专利权）人： | 华南农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12Q1/6851 |
| 代理公司： | 广州市时代知识产权代理事务所(普通合伙) 44438 | 代理人： | 卢浩 |
| 地址： | 510642 广东省*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 茶树 基因 荧光定量PCR 特征分析 反转录产物 基因组RNA 测序检测 特异性强 反转录 灵敏度 检测 内参 分析 | ||
1.基于荧光定量PCR的茶树基因CsTTG1表达特征分析方法，其特征在于，包含以下步骤：
S1.获取待测基因组RNA；
S2.将RNA反转录为cDNA；
S3.以反转录产物cDNA为模板，以
2.根据权利要求1所述的基于荧光定量PCR的茶树基因CsTTG1表达特征分析方法，其特征在于，所述待测基因组为CsTTG1基因组。
3.根据权利要求1所述的基于荧光定量PCR的茶树基因CsTTG1表达特征分析方法，其特征在于，所述待测基因组为CsTTG1基因组，所述PCR扩增引物其上游引物和下游引物的序列分别如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示。
4.根据权利要求1所述的基于荧光定量PCR的茶树基因CsTTG1表达特征分析方法，其特征在于，所述待测基因组为CsTTG1基因组，所述CsTTG1的内参基因
5.根据权利要求1所述的基于荧光定量PCR的茶树基因CsTTG1表达特征分析方法，其特征在于，所述待测基因组为CsTTG1基因组，步骤S2中，所述RNA序列分别反转录成cDNA的方法，包含以下步骤：
（1）基因组DNA去除，在RNase free 的离心管中配置如下混合液4 x gDNA wipe Mix1-4ul；模板RNA 1-4ul；RNase free ddH2O 2-7ul；用移液枪轻轻吹打混匀，放于水浴锅中水浴38-50℃ 1-4min；
（2）配置逆反转录反应体系，在以上体系中加入5x HiScript ║ qRT SuperMix║ 1-4ul，用移液枪轻轻吹打混匀；
（3）进行逆转录反应，15-30℃ 7-15min，40-60℃ 22-42min，72-90℃ 3-8min。
6.根据权利要求5所述的基于荧光定量PCR的茶树基因CsTTG1表达特征分析方法，其特征在于，所述待测基因组为CsTTG1基因组，步骤S2中，所述RNA序列分别反转录成cDNA的方法，包含以下步骤：
（1）基因组DNA去除，在RNase free 的离心管中配置如下混合液4 x gDNA wipe Mix2ul；模板RNA 2ul；RNase free ddH2O 4ul；用移液枪轻轻吹打混匀，放于水浴锅中水浴42℃ 2min；
（2）配置逆反转录反应体系，在以上体系中加入5x HiScript ║ qRT SuperMix║ 2ul，用移液枪轻轻吹打混匀；
（3）进行逆转录反应，25℃ 10min，50℃ 30min，85℃ 5min。
7.根据权利要求1所述的基于荧光定量PCR的茶树基因CsTTG1表达特征分析方法，其特征在于，步骤S3中，所述PCR扩增的方法包括以反转录产物为模板、以
（1）2×SYBR Green Mix：3-9µL；
（2）cDNA模板：0.2-1.6µL；
（3）引物各0.025-0.205µL；
（4）加水至总体积达到8-12µL；
（5）PCR反应程序：88-96℃ 8-13 min；88-96℃ 6-15s，48-68℃ 12-20s，62-83℃ 20-50s，40个循环。
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