[发明专利]一种基于双重荧光PCR法联合检测巴泰病毒及泰纳病毒的引物探针组及试剂盒

权利要求书

1.一种基于双重荧光定量PCR检测巴泰病毒及泰纳病毒的引物探针组，所述引物探针组包括针对巴泰病毒的特异性引物、巴泰病毒探针、针对泰纳病毒的特异性引物、泰纳病毒探针，所述针对巴泰病毒的特异性引物包括正向引物和反向引物，所述针对巴泰的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，所述针对巴泰的反向引物的核苷酸序列如SEQ IDNo.2所示，所述针对泰纳病毒的特异性引物包括正向引物和反向引物，所述针对泰纳病毒的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示，所述针对泰纳病毒的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示。

2.如权利要求1所述的引物探针组，其特征在于，所述巴泰病毒探针的探针序列如SEQID No.5所示。

3.如权利要求1所述的引物探针组，其特征在于，所述针对泰纳病毒的探针序列如SEQID No.6所示。

4.如权利要求1所述的引物探针组，其特征在于，所述巴泰病毒探针、泰纳病毒探针两端标记有荧光报告基团和荧光淬灭基团。

5.如权利要求4所述的引物探针组，其特征在于，所述巴泰病毒探针5’端标记有荧光报告基团，3’端标记有荧光淬灭基团。

6.如权利要求5所述的引物探针组，其特征在于，所述泰纳病毒探针5’端标记有荧光报告基团，3’端标记有荧光淬灭基团。

7.如权利要求6所述的引物探针组，其特征在于，所述巴泰病毒探针上标记的荧光报告基团、所述泰纳病毒探针上标记的荧光报告基团的荧光波长不相同。

8.一种双重荧光定量PCR检测巴泰病毒、泰纳病毒的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1-7任一所述引物探针组。

9.如权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括RNA抽提试剂、RT-PCR试剂和阳性对照中的一种或多种。

10.一种如权利要求8所述的试剂盒的双重荧光定量PCR检测巴泰病毒、泰纳病毒的检测方法，具体包括如下步骤：

1)标本的核酸提取：使用病毒RNA抽提试剂盒提取标本RNA；

2)标本RNA逆转录：使用RT-PCR试剂，将标本RNA进行逆转录PCR，获得标本的逆转录产物；

3)核酸荧光PCR检测混合液的配制：将针对巴泰病毒的特异性引物、巴泰病毒探针、针对泰纳病毒的特异性引物、泰纳病毒探针、工艺用水组成核酸荧光PCR检测混合液体系；

4)试剂配制：对核酸荧光PCR检测混合液体系进行振荡混匀，并离心；

5)加样：将步骤4所得混合液置于PCR管中，然后将步骤2所得标本逆转录产物、阳性对照品、DEPC-H₂O分别加入PCR管中，离心后立即进行PCR扩增反应；

6)通过定量荧光PCR仪器对样品进行PCR反应，并通过荧光信号的强度判断巴泰病毒和泰纳病毒的阳性和阴性。