[发明专利]蓝色犁头霉中甾类11β-羟化酶及其编码基因与应用

权利要求书

1.成套蛋白质，由蛋白质A和蛋白质B组成；

所述蛋白质A为如下（A1）-（A2）中任一所示的蛋白质：

（A1）氨基酸序列如SEQ ID No.1或SEQ ID No.1的第19-527位所示的蛋白质；

（A2）在（A1）所限定的蛋白质的N端和/或C端连接标签后得到的融合蛋白；

所述蛋白质B为如下（B1）或（B2）所示的蛋白质：

（B1）氨基酸序列如SEQ ID No.2所示的蛋白质；

（B2）在（B1）所限定的蛋白质的N端和/或C端连接标签后得到的融合蛋白。

2.成套核酸分子，由核酸分子A和核酸分子B组成；

所述核酸分子A为编码权利要求1中所述蛋白质A的核酸分子；

所述核酸分子B为编码权利要求1中所述蛋白质B的核酸分子。

3.根据权利要求2所述的成套核酸分子，其特征在于：

所述核酸分子A为核苷酸序列如SEQ ID No.3或SEQ ID No.3的第55-1584位或SEQ IDNo.5或SEQ ID No.5的第55-1584位所示的DNA分子；

所述核酸分子B为核苷酸序列如SEQ ID No.4或SEQ ID No.6所示的DNA分子。

4.如下生物材料中的任一种：

（c1）成套重组载体，由重组载体A和重组载体B组成；所述重组载体A为含有权利要求2或3中所述核酸分子A的重组载体；所述重组载体B为含有权利要求2或3中所述核酸分子B的重组载体；

（c2）成套表达盒，由表达盒A和表达盒B组成；所述表达盒A为含有权利要求2或3中所述核酸分子A的表达盒；所述表达盒B为含有权利要求2或3中所述核酸分子B的表达盒；

（c3）成套转基因细胞系，由转基因细胞系A和转基因细胞系B组成；所述转基因细胞系A为含有2或3中所述核酸分子A的转基因细胞系；所述转基因细胞系B为含有2或3中所述核酸分子B的转基因细胞系；

（c4）成套重组菌，由重组菌A和重组菌B组成；所述重组菌A为含有权利要求2或3中所述核酸分子A的重组菌；所述重组菌B为含有权利要求2或3中所述核酸分子B的重组菌。

5.一种制备用于生产氢化可的松的工程菌的方法，包括如下步骤：对酵母菌进行改造，使其表达权利要求1所述的成套蛋白质，改造后的酵母菌即为用于生产氢化可的松的工程菌。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：将权利要求2或3所述成套核酸分子导入所述酵母菌，得到表达权利要求1所述成套蛋白质的重组酵母菌，即为所述工程菌。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述成套核酸分子是通过权利要求4中所述成套重组载体或所述成套表达盒的形式导入所述酵母菌中的。

8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述成套核酸分子被整合到所述酵母菌的基因组的Gal7位点或者rDNA位点处。

9.利用权利要求5-8中任一所述方法制备得到的工程菌。

10.权利要求1所述成套蛋白质或权利要求2或3所述成套核酸分子或权利要求4所述生物材料或权利要求9所述工程菌在如下任一中的应用：

（A）制备氢化可的松；

（B）催化甾体激素类物质进行11位β羟基化。

11.一种制备氢化可的松的方法，为全细胞催化法或酶法；

所述全细胞催化法包括如下步骤：对权利要求9所述的工程菌进行发酵培养，收集菌体后加入底物，进行催化反应，反应产物中即含有氢化可的松；所述底物为能够被甾类11β-羟化酶催化生成氢化可的松的物质；

所述酶法包括如下步骤：从权利要求9所述的工程菌中提取具有甾类11β-羟化酶活性的物质，然后以粗酶液、粗酶液冻干粉或纯酶的形式催化底物生成氢化可的松；所述底物为能够被甾类11β-羟化酶催化生成氢化可的松的物质。