[发明专利]检测沙丁胺醇的荧光微球-胶体金双显色定性定量免疫层析试纸条及其制备方法

说明书

本发明公开了检测沙丁胺醇的荧光微球‑胶体金双显色定性定量免疫层析试纸条及其制备方法，在底板上依次地搭接粘贴滤纸、样本垫、喷涂有荧光微球‑沙丁胺醇单克隆抗体复合物和胶体金‑沙丁胺醇单克隆抗体复合物的玻璃纤维垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，所述的硝酸纤维素膜上包被有沙丁胺醇偶联抗原作为检测线和包被有抗鼠抗体作为质控线。检测线显色比质控线显色浅，则样本中沙丁胺醇含量大于0.5ng/mL，定性判断为阳性。定性判断为阳性的试纸条，直接插入荧光读取仪中，读取仪将荧光微球显色体系的荧光信号数值化，实现定量检测。本发明主要用于食品安全检测中沙丁胺醇的定性与定量检测。

技术领域

本发明属于食品安全中兽药残留检测领域，具体涉及一种可以同时定性并定量检测样品中沙丁胺醇的时间分辨荧光微球-胶体金双显色定性定量免疫层析试纸条及其制备方法。

背景技术

沙丁胺醇(Salbutamol，SAL)是一种选择性β-2受体激动剂，与盐酸克伦特罗一样具有促进营养再分配和生长的作用，因此被用作新型添加剂促进机体生长。由于沙丁胺醇具有在动物体内蓄积残留的特性，食用沙丁胺醇添加剂饲养的动物会引起人们不同程度的中毒反应，具体表现为骨骼肌收缩增加，引起肌肉震颤。在畜牧业生产中一些非法使用者将其作为一种生长促进剂添加到动物饲料中，增加瘦肉的生长比率。根据农业部第235号公告，沙丁胺醇为禁用添加剂，因此在食品(肉中)不得检出。现行检测标准有GB/T 22286-2008《动物源性食品中多种β-受体激动剂残留量的测定》，该方法(高效液相色谱串联质谱法)对沙丁胺醇的检出限为0.5μg/kg。

沙丁胺醇国内外主要采用GC-MS，LC-MS，酶联免疫吸附法(ELISA)和胶体金标记免疫层析试纸条等技术来实现定性和定量检测。前三种方法均需借助昂贵而复杂的仪器和设备来完成检测，成本高，并且需要高水平的专业人员来进行操作，实验结果耗时较长，无法实现现场检测，因此不适合于商检、防疫、畜牧生产者对怀疑对象的快速在线检测和监控。

免疫层析技术是出现于80年代初期的一种独特的免疫分析方式，它通常以条状纤维层析材料为固相，通过毛细作用使样品溶液在层析条上泳动，通过抗原抗体结合的免疫反应原理，层析过程中免疫复合物被富集或截留在层析材料的一定区域(检测线)，通过酶反应或直接运用可目测的标记物(如胶体金)而得到直观的实验结果(如检测线出现不同颜色的条带)；而游离标记物则越过检测线，达到与结合标记物自动分离之目的。免疫层析技术常见的目测标记载体有胶体金、乳胶、胶体硒等，其中运用最成功的标记物为胶体金。但是，胶体金免疫层析试纸条存在以下缺陷：

⑴一般试纸条均为通过肉眼观察结果进行定性分析，无法实现精准的定量检测。

⑵不同的材料基质效应明显，样本背景干扰较大，易产生假阳性结果。

⑶检测的阳性结果无法保存，通常超过判断时间后，结果不再准确可靠。

市场为了满足对样本进行定量检测的需求，各种基于不同标记物的定量检测试纸条也层出不穷，一般目前的定量检测试纸条，都是单一的标记物标记抗体后，通过小型仪器读取显色信号值，再通过绘制标准曲线进行定量检测。目前基于不同元素标记物的荧光免疫层析方法也已经出现，并获得高灵敏度，但是该定量检测方法也存在以下缺陷：

⑴实际检测中，阴性结果所占比率很高，但该方法所有试纸条均需要用仪器读取，否则不能得到结果，在做大批量样本检测时，耗时较长！

⑵定量检测中，检测部门仍然需要一个阈值来区分阴性和阳性，所以数据处理量较大；

⑶单一的荧光微球试纸条灵敏度较高，但在实际应用中，较高的灵敏度其检测线性范围则较窄，样本定量浓度范围并不适合实际中的检测需求。

发明内容

本发明的一个目的是针对上述现有技术缺陷，提供一种灵敏度高、检测时间短、操作简便并能同时实现定性和定量检测沙丁胺醇的荧光微球-胶体金双显色定性定量免疫层析试纸条。