[发明专利]基于DNA-银纳米簇变构探针的转录因子荧光检测方法

说明书

本发明属于分析检测领域，涉及一种基于DNA‑银纳米簇变构探针的转录因子荧光检测方法。该检测方法包括如下步骤：a)以发卡状DNA为模板，加入硝酸银、硼氢化钠，使其原位还原生成DNA‑银纳米簇变构探针AgSwitch；b)将多个不同浓度的转录因子溶液与步骤a)得到的AgSwitch孵育反应；c)测定体系的荧光值，获得转录因子浓度与荧光强度的线性关系，绘制标准曲线；d)在与步骤c)同样的条件下测定待测样品的荧光强度，根据步骤c)的标准曲线，得到待测样品中转录因子的浓度。本发明的转录因子检测方法具有免标记，无酶，灵敏度高的优点，能够实现生物样品中转录因子的高效检测。

技术领域

本发明属于分析检测领域，更具体地，涉及一种基于DNA-银纳米簇变构探针的转录因子荧光检测方法。

背景技术

转录因子(Transcription factors，TFs)是细胞中的DNA结合蛋白，这类蛋白在调控细胞的增殖、凋亡、转化等方面具有至关重要的作用。当细胞收到来自细胞内或细胞外的信号时，信号通路中各种信号分子的表达发生变化，最终这些信号分子逐级将信息传递至位于细胞核外的处于静息态的转录因子，这些转录因子被激活而入核，与靶基因上的转录因子结合区结合，启动转录过程。转录过程起到调节细胞蛋白质表达的作用，能够改变整个细胞的转录状态，从而起到调控生命过程的作用，这些生命过程既包括炎症、癌变、自身免疫疾病，也包括对这些疾病的治疗或抵抗。当前，大量的临床检测或药物开发针对的是信号通路中的上游分子，但是这些分子种类繁多，很难选择其中的少部分作为有力的靶点或目标物。与之相比，转录因子的数量远远小于信号分子，并且信号分子的改变最终会汇集于转录因子，因此，转录因子既可以成为临床治疗的靶点，又可以作为一种潜在的诊断标志物。但是目前尚缺乏高效检测TFs，实验室应用的方法由于通量低、难以定量检测等缺点而无法应用于临床，而新近发表的研究大多应用了昂贵的荧光素修饰的核酸、价格贵且保存条件苛刻的工具酶，或是复杂的分析步骤，使得这些技术难以在临床应用上推广。

近期基于变构效应的仿生探针有一些研究，这类探针中含有能够识别目标物的区域，当目标物与其结合时，探针的构象发生改变，并且同时产生能够用于检测的信号，包括电化学信号、荧光信号等。其中，能够产生荧光信号的变构探针由于其检测手段简单，灵敏度高，因而备受关注。但是目前，大部分荧光变构探针的构建仍然需要较为昂贵的荧光化学基团的修饰，少数免标记(label-free)的变构探针灵敏度较低，只能实现μM级别的检测。因此，开发高灵敏的免标记变构探针仍然具有很强的科学意义。

综上所述，实现转录因子的快速检测能够强有力地辅助临床检测以及基础研究的转化，因此，开发高灵敏低成本的变构探针具有重要的科学意义。将低成本的变构探针应用于转录因子的检测，不仅是一种新颖的检测手段，也将为变构探针的设计开发带来新的切入点。

发明内容

本发明的目的是提供一种基于DNA-银纳米簇变构探针的转录因子荧光检测方法。本发明的转录因子检测方法具有免标记，无酶，灵敏度高的优点，能够实现生物样品中转录因子的高效检测。

为了实现上述目的，本发明提供一种基于DNA-银纳米簇变构探针的转录因子荧光检测方法，该检测方法包括如下步骤：

a)以发卡状DNA为模板，加入硝酸银、硼氢化钠，使其原位还原生成DNA-银纳米簇变构探针AgSwitch；发卡状DNA中含有G增强序列，变构探针AgSwitch中的DNA-银纳米簇与所述G增强序列的距离变化使得体系荧光发生变化；

b)将多个不同浓度的转录因子溶液与步骤a)得到的AgSwitch孵育反应，所述转录因子能够与变构探针AgSwitch特异性结合；

c)测定体系的荧光值，获得转录因子浓度与荧光强度的线性关系，绘制标准曲线；

d)在与步骤c)同样的条件下测定待测样品的荧光强度，根据步骤c)的标准曲线，得到待测样品中转录因子的浓度。