[发明专利]运营中的沥青路面上微生物种属及其数量确定方法在审
| 申请号： | 201810912938.9 | 申请日： | 2018-08-06 |
| 公开（公告）号： | CN108998498A | 公开（公告）日： | 2018-12-14 |
| 发明（设计）人： | 许涛;张韩帅;王斯文;夏文静 | 申请（专利权）人： | 南京林业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/06 | 分类号： | C12Q1/06 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 210037 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 沥青路面 微生物种 微生物 运营 划线分离 数量确定 牛肉膏蛋白胨培养基 工作环境条件 富集培养液 抗微生物 老化作用 使用寿命 室内火焰 稀释菌液 现场采集 优势菌种 运营过程 单菌落 接种环 稀释度 菌落 测序 富集 无菌 制备 沥青 样本 老化 观察 分析 | ||
【权利要求书】：
1.一种运营中的沥青路面上微生物种属及其数量确定方法，其特征在于该方法的具体步骤如下：
(1)选取不同等级道路的典型路段，在路肩部分沥青路面表层取样，将取得的试样装入已灭菌的样品袋中，密封，记录样品编号、采集时间、地点，每隔20米采集一份样品，每个路段采集10份样品；
(2)室内除去杂物后风干，制备成大小相同的样品，取一定质量样品放入液体培养基中，在28℃恒温摇床上富集培养7天，制备稀释度为10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6的溶液；
(3)采用无菌吸管分别吸取每个稀释度的菌液0.1毫升三次，对应滴入已写上编号的三个平板培养基内，将涂布好的平板培养基倒置于30℃恒温摇床中培养4天；
(4)用接种环挑取第一次富集培养液，在油平板上划线分离，三次富集后，观察在平板上形成的优势菌种，选取形态一致的单菌落，在牛肉膏蛋白胨培养基上多次划线分离，以纯化得到的单菌落，通过16S rDNA的聚合酶链反应、测序及NCBI数据库的Blast比对分析，鉴定具体微生物的种属；
(5)在无菌室内火焰旁分别测定不同稀释度的菌落数，用灭菌吸管各吸取1毫升注入平皿，注入15毫升营养琼脂培养基，旋转平皿，混合均匀后，置于培养箱内培养24小时，进行菌落统计，确定不同种属微生物数量。
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