[发明专利]一种分离萤火虫发光囊细胞的方法

权利要求书

1.一种分离萤火虫发光囊细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将发光囊组织置于80～120ul胰酶中，剪碎；

(2)在CO2恒温箱中消化3～7min；

(3)在含8％～12％FBS的Sf-900^TMIII SFM培养液终止消化。

2.根据权利要求1所述一种分离萤火虫发光囊细胞的方法，其特征在于，包括步骤(1)之前的准备步骤，如下：

用70％～80％的酒精对萤火虫消毒，取出萤火虫发光囊，浸泡与PBS中，在4℃的环境下保存备用。

3.根据权利要求1所述一种分离萤火虫发光囊细胞的方法，其特征在于，步骤(1)中的采用小号手术剪剪至肉眼无法可见大小。

4.一种权利要求1所述萤火虫发光囊细胞的冻存方法，其特征在于，用胰酶消化法收集2瓶处于对数生长期的萤火虫发光囊细胞，1000g离心5min后弃去上清，用1mL冻存含20％FBS和10％DMSO的Sf-900^TMIII SFM培养液将细胞重悬后置于冻存管中，将冻存管置于程序降温盒中于-80℃过夜，最后投入-196℃液氮中长期保存，并做好记录。

5.一种权利要求4所述冻存萤火虫发光囊细胞的复苏方法，其特征在于，从液氮中取出冻存管，于37℃水浴中迅速解冻，1000g离心5min收集细胞后接种于25cm2的培养瓶中，放置于培养箱中27℃培养，待细胞贴壁后弃上清，更换培养液，继续培养。