[发明专利]细胞上清的总蛋白定量检测试剂盒及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了细胞上清的总蛋白定量检测试剂盒及其制备方法与应用。该用于测定细胞培养上清液中的蛋白质含量的试剂盒,包括标准品包被的酶标板和考马斯亮蓝G250染色液，所述标准品包被的酶标板按照包括下述步骤的方法制备：将牛血清白蛋白用溶剂配制成牛血清白蛋白浓度不同的N种溶液，将所述N种溶液均分别加入酶标板的不同孔内，包被所述酶标板，得到标准品包被的酶标板；所述N为大于等于8的自然数；所述溶剂为pH值为7.4的磷酸缓冲盐溶液。本发明实现了快速、灵敏和准确地检测液体中的总蛋白含量，可用于生物化妆品制备，抗体制备，中药刺激细胞产生分泌物领域中的细胞培养上清液中的蛋白质含量的检测。

技术领域

本发明涉及蛋白质含量检测领域中一种细胞上清的总蛋白定量检测试剂盒及其制备方法与应用。

背景技术

蛋白质是生命的物质基础，是有机大分子，是构成细胞的基本有机物，是生命活动的主要承担者。没有蛋白质就没有生命。氨基酸是蛋白质的基本组成单位，氨基酸通过脱水缩合形成肽链。蛋白质是由一条或多条多肽链组成的生物大分子，每一条多肽链有二十至数百个氨基酸残基不等；各种氨基酸残基按一定的顺序排列。蛋白质是与生命及与各种形式的生命活动紧密联系在一起的物质。机体中的每一个细胞和所有重要组成部分都有蛋白质参与。蛋白质占人体重量的16.3％，即一个60kg重的成年人其体内约有蛋白质9.8kg。人体内蛋白质的种类很多，性质、功能各异，但都是由20多种氨基酸按不同比例组合而成的，并在体内不断进行代谢与更新。蛋白质的不同在于其氨基酸的种类、数目、排列顺序和肽链空间结构的不同。蛋白质是机体细胞的重要组成部分，是人体组织更新和修补的主要原料。人体的每个组织：毛发、皮肤、肌肉、骨骼、内脏、大脑、血液、神经、内分泌等都是由蛋白质组成。

细胞培养上清液含有丰富多彩的分泌蛋白，比如：酶、抗体、蛋白质类的激素、细胞因子等。细胞因子是可溶性蛋白，是机体多种细胞分泌的小分子蛋白质，是由活化细胞分泌的具有高活性、多功能的主要介导和调节免疫应答及炎症反应的小分子多肽，通过结合细胞表面的相应受体发挥生物学作用，具有调节固有免疫和适应性免疫应答，促进造血，以及刺激细胞活化，增殖，分化等功能。由于基因工程、细胞工程研究的飞速发展，不仅克隆了早先发现的生物活性肽的cDNA，而且发现了许多新的细胞因子，并对各种细胞因子产生来源、分子结构和基因、相应的受体、生物学功能以及与临床的关系等进行了大量的研究，成为当今基础免疫学和临床免疫学研究中一个活跃的领域。细胞因子对人类许多常见病、多发病及传染性疾病的治疗作用，已经不是传统疗法(化学药物治疗、放射治疗、手术治疗等)所能比拟的。细胞因子的发现、合成及其有关生物学特性已经或将要继续不断被阐明，愈来愈多的细胞因子得以商品化。比如：生物化妆品，制备抗体，中药刺激细胞产生分泌物研究领域等。

生物化妆品是指应用生物工程技术及其制品制得的化妆品，其主要成分生物活性多肽大部分是细胞生长因子，它们在体内含量极微，但生物活性极高，对多种细胞生理功能和代谢活动发挥生物调节作用，直接或间接地影响多种类型细胞的生长、分裂、分化、增殖和迁移，在美容护肤、整形外科、烧伤溃疡以及各种皮肤病的伤口修复与愈合中有重要作用。细胞生长因子经过稳定的结构修饰或特殊的保护处理后，以一定的有效浓度添加到化妆品中，可以有效地与皮肤细胞发生作用，促进上皮细胞营养代谢，保护皮肤，预防由于各种原因导致的皮肤损伤。正常护肤品中添加活性细胞生长因子还可以有效地促进皮下胶原细胞的功能，加速皮肤胶原细胞的生长，使细胞加速分泌胶原，从而达到抗皱及延缓衰老的作用。

由免疫反应抗原刺激机体后，产生的特异性反应，包括细胞免疫、体液免疫，表现为免疫细胞分裂繁殖，产生淋巴因子，合成并分泌抗体。对于免疫细胞化学的技术关键之一是制备特异性强、亲合力大、滴度高的特异性抗体。

由细胞自体产生的分泌蛋白，或由于药物或外来条件刺激细胞产生的分泌到培养基中蛋白质目前已经越来越多的商品化，研发测定细胞培养上清液中总蛋白含量的检测试剂盒可以更好的监测这类产品的质量。

发明内容