[发明专利]一种基于Y型DNA模板荧光铜纳米簇的核酸信号放大检测试剂盒及检测方法

说明书

本发明提供了一种基于Y型DNA模板荧光铜纳米簇的核酸信号放大检测试剂盒，包括下列核酸序列：序列H1：5’端为a区，中间为茎环结构，其中茎环结构的茎结构中靠近3’端的一侧包含有b*区；序列H2：5’端为b区，中间为茎环结构，其中茎环结构的茎结构中靠近3’端的一侧包含有c*区；序列H3：5’端为c区，中间为茎环结构，其中茎环结构的茎结构中靠近3’端的一侧包含有a*区；其中目标核酸序列3’端为a*区，a与a*、b与b*、c与c*互补配对。还提供了采用上述的试剂盒检测基于Y型DNA模板荧光铜纳米簇的核酸信号放大方法。本发明的方法无需进行核酸修饰即可产生荧光信号，并且基于无酶信号放大策略，反应条件温和。

技术领域

本发明属于生物工程领域，涉及一种生物传感技术，具体来说是一种基于Y型DNA模板荧光铜纳米簇的核酸信号放大检测试剂盒及检测方法。

背景技术

基于核酸扩增的信号放大技术已经被广泛应用于疾病的靶向诊疗、基因表达、药物筛选及即时诊断等领域。相比传统的聚合酶链式反应技术(Polymerase ChainReaction，PCR)，基于核酸恒温扩增反应的信号放大技术具备反应条件温和、信号放大效率高、成本低廉及不易受干扰等优点，成为当前信号放大技术领域的研究热点。

众多核酸恒温扩增技术中，催化发夹组装(Catalytic Hairpin Assembly，CHA)等以核酸杂交反应熵为驱动力的信号放大技术，因反应无需酶的参与而受到广泛青睐。但是，目前建立的检测荧光检测方法，往往需要对核酸探针进行荧光染料修饰或采用核酸染料作为荧光信号，不仅提高了实验成本，而且核酸染料还具有一定的生物毒性。

DNA模板的荧光铜纳米簇是近年来发展的新型荧光纳米颗粒，具有优异的荧光特性，合成方法简单、快速，被广泛用于目标的非标记检测中。然而，将DNA模板荧光铜纳米簇与上述无酶信号放大技术结合，需要通过磁分离等方式除去过量的核酸，降低背景信号，无法实现快速的均相检测。

发明内容

针对现有技术中的上述技术问题，本发明提供了一种基于Y型DNA模板荧光铜纳米簇的核酸信号放大检测试剂盒及检测方法，所述的这种基于Y型DNA模板荧光铜纳米簇的核酸信号放大检测试剂盒及检测方法要解决现有技术中非酶信号放大技术的荧光检测中需要信号标记的技术问题。

本发明提供了一种基于Y型DNA模板荧光铜纳米簇的核酸信号放大检测试剂盒，包括下列核酸序列：

序列H1：5’端为a区，中间为茎环结构，其中茎环结构的茎结构中靠近3’端的一侧包含有b*区；

序列H2：5’端为b区，中间为茎环结构，其中茎环结构的茎结构中靠近3’端的一侧包含有c*区；

序列H3：5’端为c区，中间为茎环结构，其中茎环结构的茎结构中靠近3’端的一侧包含有a*区；

其中目标核酸序列3’端为a*区，a与a*、b与b*、c与c*互补配对。

具体的，

H1序列：其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，其中5’端序列gcttga为a区，中间序列gatgttagggagtagtgc-tccaatcacaac-gcactactccct为茎环结构，环部分序列为tccaatcacaac，其中茎环结构的茎结构中靠近3’端的一侧包含有b*区，b*区序列为ctccct；