[发明专利]一种通过改变非限速酶的核糖体结合位点提高异戊二烯工程菌产量的方法有效
| 申请号： | 201810916651.3 | 申请日： | 2018-08-13 |
| 公开（公告）号： | CN109097384B | 公开（公告）日： | 2021-08-13 |
| 发明（设计）人： | 张海波;李美洁;咸漠;吴桐 | 申请（专利权）人： | 中国科学院青岛生物能源与过程研究所 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N1/21;C12P5/02;C12R1/19 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 邓宇 |
| 地址： | 266101 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 通过 改变 限速 核糖体 结合 提高 异戊二烯 工程 产量 方法 | ||
1.一种通过改变非限速酶的核糖体结合位点提高异戊二烯工程菌产量的方法，其特征在于，计算异戊二烯工程菌所有外源基因的翻译起始效率，外源基因包括限速酶基因和非限速酶基因，统计出所有翻译起始效率高于限速酶基因翻译起始效率的非限速酶，然后从中选择一个或多个非限速酶基因通过置换其核糖体结合位点核苷酸序列调低其翻译起始效率；
所述异戊二烯工程菌外源表达的基因及各基因的Genebank登录号或核苷酸序列如下所示：
乙酰辅酶A酰基转移酶/羟甲基戊二酰辅酶A还原酶基因mvaE的Genebank登录号为AAG02439；
3-羟-3甲基戊二酰辅酶A合酶基因mvaS的Genebank登录号为AAG02438；
甲羟戊酸激酶基因ERG12的Genebank登录号为855248；
磷酸甲羟戊酸激酶基因ERG8的Genebank登录号为855260；
甲羟戊酸焦磷酸脱羧酶基因ERG19的Genebank登录号为100195467；
异戊烯焦磷酸异构酶基因IDI1的Genebank登录号为855986；
异戊二烯合酶基因IspS为来源于甘薯（
筛选得到的非限速酶基因为乙酰辅酶A酰基转移酶/羟甲基戊二酰辅酶A还原酶基因mvaE或甲羟戊酸焦磷酸脱羧酶基因ERG19；
改变非限速酶的核糖体结合位点的具体方法如下：
选择乙酰辅酶A酰基转移酶/羟甲基戊二酰辅酶A还原酶基因mvaE通过用如SEQ IDNO.3所示的核苷酸序列置换其如SEQ ID NO.1所示的原始核糖体结合位点核苷酸序列来调低其翻译起始效率；或选择甲羟戊酸焦磷酸脱羧酶基因ERG19通过用如SEQ ID NO：6所示的核苷酸序列置换其如SEQ ID NO：4所示的原始核糖体结合位点核苷酸序列来调低其翻译起始效率。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述异戊二烯工程菌以大肠杆菌（
3.权利要求1或2任一所述方法构建的异戊二烯工程菌。
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