[发明专利]一种提高肌原纤维蛋白水溶性的多肽混合物的制备方法

权利要求书

1.一种提高肌原纤维蛋白水溶性的多肽混合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、将纳地青霉菌种接入察氏培养基斜面，置于(27±1)℃恒温培养箱中培养4天；

S2、培养结束后从斜面上挑取长势较好的菌苔转接入另一个斜面，再置于(27±1)℃恒温培养箱中培养4天；如此重复转接3次，即获得活化好的菌株斜面；

S3、将步骤S2得到的活化好的菌株斜面用无菌水反复冲洗吹打菌落，将孢子和菌丝移入50mL灭菌三角瓶内，无菌纱布过滤，得到孢子悬浮液；

S4、取10mL步骤S3得到的孢子悬浮液进行梯度稀释得到10⁸-10⁹cfu/mL浓度的梯度稀释液，作为接种的菌悬液；

S5、选择经检疫合格、剔骨后的鸡肉，去皮和脂肪，洗净切成重量为10g的肉块，肉块经高压蒸汽灭菌锅灭菌15min；

S6、将步骤S5中得到的灭菌后的肉块在无菌操作条件下放入无菌聚乙烯袋中，接入步骤S4中得到的菌悬液，接种浓度为10⁸-10⁹cfu/mL，接种量为30mL/kg，接种后于温度29-30℃下非线性超声发酵15-16天得到发酵后的肉块；

S7、将步骤S6中得到的发酵后的肉块置于绝缘塑料圆盘上，在搅拌条件下、在0.15MV/m的复合多重极板高压静电场中、于温度15℃条件下后熟8天，得到后熟后的肉块；

S8、在步骤S7中得到的后熟后的肉块中加入重量为后熟后的肉块的重量的2.4％的木瓜蛋白酶，水解后纱布过滤得到水解产物；

S9、将步骤S8中得到的水解产物13000r/min离心60min，取上清液用0.45μm滤膜初滤后进行超滤；超滤中，采用全回流的方式收集两组分，分别为分子量大于10kDa的组分Ⅰ和分子量小于或等于10kDa的组分II，将组分II冻干得到所述的多肽混合物的干粉。

2.根据权利要求1所述的提高肌原纤维蛋白水溶性的多肽混合物的制备方法，其特征在于，步骤S1中的纳地青霉菌种采用菌株保藏号为CGMCC No.12777的纳地青霉QAUS012株。

3.根据权利要求1所述的提高肌原纤维蛋白水溶性的多肽混合物的制备方法，其特征在于，步骤S6中，非线性超声发酵的具体操作为：在发酵的过程中，从0天开始每隔24小时采用超声波发射器，在频率为20kHz、功率为900W、脉冲3s、间歇2s条件下非线性超声处理30min。

4.根据权利要求1所述的提高肌原纤维蛋白水溶性的多肽混合物的制备方法，其特征在于，步骤S8中，水解的条件为：温度为50℃、pH为7.0、固液比为1:4；绞碎混匀后，水解时长为7小时。

5.根据权利要求1所述的提高肌原纤维蛋白水溶性的多肽混合物的制备方法，其特征在于，步骤S9中，超滤的条件为：超滤膜孔径截留分子量为10kDa，温度为25℃，进口压力为137.90kPa，出口压力为68.95kPa。