[发明专利]一种测定抗组蛋白抗体IgG的试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种测定抗组蛋白抗体IgG的试剂盒，其特征在于：所述的试剂盒包括第一试剂和第二试剂，所述的第一试剂包括偶联有生物素的混合抗原，所述的混合抗原包括组蛋白抗原、H1片段以及H2A-H2B复合片段；所述的第二试剂包括偶联有碱性磷酸酶的抗人IgG抗体，

所述组蛋白抗原、所述H1片段、所述H2A-H2B复合片段的质量比为2：1：1，

所述的第一试剂的制备方法包括如下步骤：

（1）将混合抗原与经N-羟基琥珀酰亚胺活化的生物素按质量比10~50:1的比例混合，然后在15~40℃下静置20~40min；

（2）加入物质的量浓度为0.01~0.11 mol/L的三羟甲基氨基甲烷缓冲液，在15~40℃下静置10~20min，再加入甘油，得到浓溶液；其中，所述的三羟甲基氨基甲烷缓冲液的添加量为每1毫克所述的混合抗原加入15~20微升；所述的甘油的添加量为每1毫克所述的混合抗原加入400~600微升；

（3）用pH为7~7.5、物质的量浓度为0.005~0.1mol/L的磷酸盐缓冲液将所述的浓溶液稀释成偶联有生物素的混合抗原的浓度为1~5微克/毫升，即得所述的第一试剂；

所述的试剂盒还包括磁微粒分离试剂、化学发光底物、校准品、质控品和清洗液，

所述的磁微粒分离试剂包括表面连接有亲和素的纳米磁微粒，

所述的校准品包括所述的抗组蛋白抗体的浓度为20RU/mL的第一校准品和所述的抗组蛋白抗体的浓度为200RU/mL的第二校准品，

所述的质控品包括所述的抗组蛋白抗体的浓度为10RU/mL的第一质控品和所述的抗组蛋白抗体的浓度为80RU/mL的第二质控品。

2.根据权利要求1所述的测定抗组蛋白抗体IgG的试剂盒，其特征在于：所述的第一试剂中所述的偶联有生物素的混合抗原的浓度为1~5微克/毫升。

3.根据权利要求1所述的测定抗组蛋白抗体IgG的试剂盒，其特征在于：所述的第二试剂中所述的偶联有碱性磷酸酶的抗人IgG抗体的浓度为0.1~2.5微克/毫升。

4.一种如权利要求1至3中任一项所述的试剂盒的制备方法，其特征在于：

所述的第一试剂的制备方法包括如下步骤：

（1）将混合抗原与经N-羟基琥珀酰亚胺活化的生物素按质量比10~50:1的比例混合，然后在15~40℃下静置20~40min；

（2）加入物质的量浓度为0.01~0.11 mol/L的三羟甲基氨基甲烷缓冲液，在15~40℃下静置10~20min，再加入甘油，得到浓溶液；其中，所述的三羟甲基氨基甲烷缓冲液的添加量为每1毫克所述的混合抗原加入15~20微升；所述的甘油的添加量为每1毫克所述的混合抗原加入400~600微升；

（3）用pH为7~7.5、物质的量浓度为0.005~0.1mol/L的磷酸盐缓冲液将所述的浓溶液稀释成偶联有生物素的混合抗原的浓度为1~5微克/毫升，即得所述的第一试剂；

所述的第二试剂的制备方法包括如下步骤：

（1）将抗人IgG抗体加入到浓度为4~20mg/mL的2-亚胺基硫烷盐酸盐偶联剂中，在15~40℃下静置18~25min；其中，所述的2-亚胺基硫烷盐酸盐偶联剂的添加量为每1毫克所述的抗人IgG抗体添加10~15毫升；

（2）向步骤（1）中加入浓度为0.05~0.11mol/L甘氨酸溶液，在15~40℃下静置4~5min，用G-25凝胶柱除盐，收集活化后的抗人IgG抗体，其中，所述的甘氨酸溶液的添加量为每1毫克所述的抗人IgG抗体添加0.5~0.6毫升；

（3）将碱性磷酸酶加入到浓度为4~5mg/mL的4-(N-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯溶液中，在15~40℃下静置25~35min，用G-25凝胶柱除盐，收集活化后的碱性磷酸酶，其中，所述的4-(N-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯溶液的添加量为每1毫克所述的碱性磷酸酶添加0.25~0.9毫升；

（4）将步骤（2）活化后的抗人IgG抗体和步骤（3）活化后的碱性磷酸酶混合，在2~8℃下静置12~24h，用Supperdex200凝胶纯化柱纯化，获得连接物浓溶液，其中，所述的抗人IgG抗体和所述的碱性磷酸酶的投料质量比为1:0.5~1.5；

（5）将所述的连接物浓溶液用含质量百分比为0.1~3%的牛血清白蛋白、pH为7.8~8.0、物质的量浓度为0.01~0.11mol/L的三羟甲基氨基甲烷缓冲液稀释到偶联有碱性磷酸酶的抗人IgG抗体的浓度为0.1~2.5微克/毫升，即得所述的第二试剂。