[发明专利]一种测定抗组蛋白抗体IgG的试剂盒及检测方法

说明书

本发明涉及一种测定抗组蛋白抗体IgG的试剂盒，其特征在于：所述的试剂盒包括第一试剂和第二试剂，所述的第一试剂包括偶联有生物素的混合抗原，所述的混合抗原包括组蛋白抗原、H1片段以及H2A‑H2B复合片段；所述的第二试剂包括偶联有碱性磷酸酶的抗人IgG抗体。本发明的试剂盒及检测方法具有稳定性好，灵敏度高，重复性好等优点，同时检测时间短，完成一个测试所需的总时间在50分钟以内，而且操作简单方便，真正实现了检测全自动化，另外，本发明的试剂盒SLE患者的阳性检出率高。

技术领域

本发明属于磁微粒化学发光免疫诊断技术领域，具体涉及一种测定抗组蛋白抗体IgG的试剂盒及检测方法。

背景技术

抗核抗体(antinuclear antibody，ANA)又称抗核酸抗原抗体，是一组将自身真核细胞的各种成分脱氧核糖核蛋白(deoxyribonucleoprotein，DNP)、DNA、可提取的核抗原(extractable nuclear antigen，ENA)和RNA等作为靶抗原的自身抗体的总称。抗核抗体在多种自身免疫病中均呈不同程度的阳性率，如系统性红斑狼疮(SLE，95％～100％)、类风湿性关节炎(RA，10％～20％)、混合性结缔组织病(MCTD，80％～100％)、干燥综合症(SS,10％～40％)、全身性硬皮病(PSS，85％～90％)、狼疮性肝炎(LH，95％～100％)、原发性胆汁性肝硬化(PBC，95％～100％)等。其中，组蛋白(Histone,His)是ANA的主要靶抗原之一。

组蛋白是一种与DNA结合组成染色体的碱性蛋白质，由H1、H2A、H2B、H3、H4、H5、[H2A-H2B]-DNA二聚体组成，常以四聚体形式存在组成核小体，无种属特异性和器官特异性，易与DNA、抗体及补体成分结合，正常人群常为阴性。抗组蛋白抗体多见于50％～70％SLE，也见于95％的药物性狼疮患者，后者常缺乏针对H2A、H2B的自身抗体。也有学者报告SLE患者抗组蛋白抗体阳性率为35.6％，但活动性SLE患者高达90％，其中94％的患者无明确服药史；原发性胆汁性肝硬化患者为5％～14％，类风湿性关节炎为24％，特别是伴有血管炎的患者；抗H2A-H2B复合物的组蛋白抗体，在SLE和普鲁卡因酰胺诱发的SLE阳性率较高，而抗H3-H4复合物的组蛋白抗体则多见于肼屈嗪诱发的SLE患者。

由于间接免疫荧光法检测抗组蛋白抗体费时费力，目前常用ELISA法。组蛋白亚型较多，在做组蛋白总抗体检测时，最好同时检测抗H2A、H2B抗体，以排除药物性狼疮。

目前对于抗His抗体的检测方法已有报道，对于此病的检测方法主要为间接免疫荧光法和酶联免疫吸附法，但这些方法都存在着不足之处；

一、间接免疫荧光法

该法的基本原理是血清样本中的特异性抗体与切片中的抗原特异性结合后，继用间接荧光抗体，与抗原抗体复合物结合，形成抗原抗体荧光复合物。在荧光显微镜下，根据复合物的发光情况来确定所检测的结果。该方法评价：由于结合在抗原抗体复合物上的荧光素抗体增多，发出的荧光亮度强，因而其敏感性强。但是其不足也是明显的：

(1)运用此法是可能出现假阳性。

(2)在分析结果时无法根据分子量的大小区分非特异性反应。

(3)操作相对复杂，需要价格较昂贵的荧光显微镜，在很多基层医院难以推广，同时，不适用于样本量较大的实验室和诊断医院。

(4)荧光测定中的本底较高，荧光免疫技术用于定量测定有一定困难。

(5)结果判定需要有经验的专业人员，分析结果的客观性不足。

二、酶联免疫吸附法