[发明专利]基于聚酰胺酸和肌氨酸氧化酶的肌氨酸电化学检测方法有效
| 申请号： | 201810922017.0 | 申请日： | 2018-08-14 |
| 公开（公告）号： | CN108982606B | 公开（公告）日： | 2020-09-25 |
| 发明（设计）人： | 李金龙;张永臣;时瑞;滕晓燕;胡琴琴 | 申请（专利权）人： | 南京市第二医院（江苏省传染病医院;南京市公共卫生医疗中心） |
| 主分类号： | G01N27/26 | 分类号： | G01N27/26;G01N27/327 |
| 代理公司： | 南京瑞弘专利商标事务所(普通合伙) 32249 | 代理人： | 冯慧 |
| 地址： | 210003 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 基于 聚酰胺 氨酸 氧化酶 电化学 检测 方法 | ||
1.一种基于聚酰胺酸和肌氨酸氧化酶的肌氨酸电化学检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)聚酰胺酸(PAA)和肌氨酸氧化酶(SOX)在玻碳电极(GCE)上的固定化
1)将二甲基甲酰胺(DMF)溶液作为溶剂制备聚酰胺酸(PAA)溶液，并将聚酰胺酸(PAA)溶液超声处理至其完全溶解，得超声处理后的聚酰胺酸(PAA)溶液；
2)将步骤1)得到的聚酰胺酸(PAA)溶液沉积在玻碳电极(GCE)表面，并在室温下干燥过夜,得到聚酰胺酸(PAA)修饰的玻碳电极(GCE)；
3)将均匀分散的2.5％戊二醛溶液滴加到步骤2)得到的聚酰胺酸(PAA)修饰的玻碳电极(GCE)表面，并在25℃下干燥2小时以在玻碳电极(GCE)表面形成膜；
4)将浓度为1mg/mL的肌氨酸氧化酶(SOX)溶液滴在步骤3)得到的玻碳电极(GCE)表面，并在4℃下过夜以在玻碳电极(GCE)表面形成肌氨酸氧化酶(SOX)层；
(2)电化学检测
用计时电流法在含有不同浓度肌氨酸的0.5M PBS中进行，起始电位为-0.4V，滴样间隔时间为150s，其中，0.5M PBS的pH为7.2；
用电化学阻抗谱(Electrochemical Impedance Spectroscopy，简称EIS)在含有0.1MKCl的5.0mM[Fe(CN)6]3-/4-溶液中进行电化学检测，频率为10-104Hz。
2.如权利要求1所述的肌氨酸电化学检测方法，其中，所述的步骤(1)-1)中制备的聚酰胺酸(PAA)浓度为3-5mg/mL。
3.如权利要求1所述的肌氨酸电化学检测方法，其中，所述的步骤(1)-1)中制备的聚酰胺酸(PAA)浓度为4mg/mL。
4.如权利要求1所述的肌氨酸电化学检测方法，其中，所述的步骤(1)-1)中超声处理时间为20-40分钟。
5.如权利要求1所述的肌氨酸电化学检测方法，其中，所述的步骤(1)-1)中超声处理时间为30分钟。
6.如权利要求1所述的肌氨酸电化学检测方法，其中，所述的步骤(1)-2)中沉积在玻碳电极(GCE)表面的聚酰胺酸(PAA)溶液的体积为3-6μL。
7.如权利要求1所述的肌氨酸电化学检测方法，其中，所述的步骤(1)-2)中沉积在玻碳电极(GCE)表面的聚酰胺酸(PAA)溶液的体积为5μL。
8.如权利要求1所述的肌氨酸电化学检测方法，其中，所述的步骤(1)-3)中滴加到改性的玻碳电极(GCE)表面的2.5％戊二醛溶液体积为3-6μL。
9.如权利要求1所述的肌氨酸电化学检测方法，其中，所述的步骤(1)-3)中滴加到改性的玻碳电极(GCE)表面的2.5％戊二醛溶液体积为5μL。
10.如权利要求1所述的肌氨酸电化学检测方法，其中，所述的步骤(1)-4)中滴加到玻碳电极(GCE)表面上的肌氨酸氧化酶(SOX)溶液体积为3-6μL。
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